人尿激酶用于雄性小鼠免疫避孕的有效性研究.pdf

1、第一部分人尿激酶用于雄性小鼠免疫避孕的免疫方法和效價(jià)分析 目的：建立利用人源尿激酶（uPA）分子作為抗原誘導(dǎo)雄性昆明小鼠產(chǎn)生抗人uPA多克隆抗體的實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)所用免疫方法的有效性及穩(wěn)定性。 方法：將成年雄性昆明小鼠隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組（不施予任何處理）、佐劑對(duì)照組（100μl生理鹽水+等量佐劑乳化后皮下多點(diǎn)注射）；uPA低劑量免疫組（20μg/100μl uPA溶液100μl+等量佐劑乳化后皮下多點(diǎn)注射）、uPA中

2、劑量免疫組（40μg/100μl uPA溶液100μl+等量佐劑乳化后皮下多點(diǎn)注射）、uPA高劑量免疫組（80μg/100μl uPA溶液100μl+等量佐劑乳化后皮下多點(diǎn)注射）。每2周免疫1次，于第3次免疫后1周取其尾動(dòng)脈血清以酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)各組抗體效價(jià)，設(shè)PBS對(duì)照便于比較背景溶液OD450值。以上方法在不同批次雄鼠中重復(fù)3次。 結(jié)果：以ELISA法測(cè)出血清OD450值間接反映血清中抗體相對(duì)含量。uPA低

3、、中、高劑量免疫組與空白、佐劑對(duì)照組相比較，抗人uPA多克隆抗體相對(duì)含量增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨著uPA免疫劑量的增加，誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體相對(duì)含量有下降趨勢(shì)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；uPA低、中、高劑量免疫組血清中抗人uPA多克隆抗體效價(jià)均達(dá)到1：10240以上。 結(jié)論：建立了利用人源uPA分子作為抗原誘導(dǎo)雄性小鼠產(chǎn)生抗人uPA多克隆抗體的實(shí)驗(yàn)方法，使用該法免疫3次即可在雄性小鼠體內(nèi)產(chǎn)生穩(wěn)定的抗體效價(jià)。

4、 第二部分人尿激酶免疫雄性小鼠對(duì)其生殖能力的影響 實(shí)驗(yàn)一：人尿激酶免疫雄性小鼠對(duì)其交配能力和生育能力的影響 目的：通過(guò)人源uPA分子免疫后雄性小鼠的交配實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)免疫后雄鼠交配能力和生育能力的改變。 方法：動(dòng)物分組和處理參照第一部分。于免疫3次后分別將各組雄鼠與處于發(fā)情期或發(fā)情前期的成年雌鼠進(jìn)行合籠，次日查陰栓或鏡下檢查陰道細(xì)胞灌洗涂片，計(jì)算各組雄鼠的交配成功率；于交配成功后第14天將雌鼠解剖，觀察各組雄

5、鼠致雌鼠妊娠率并計(jì)算孕鼠的平均活胎數(shù)。 結(jié)果：各組雄鼠的交配成功率無(wú)明顯差異（P＞0.05）；uPA低、中、高劑量免疫組雄鼠的致雌鼠妊娠率以及平均活胎數(shù)與對(duì)照組相比顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），空白和佐劑對(duì)照組之間未見(jiàn)明顯差異（P＞0.005）。 結(jié)論: 采用人尿激酶免疫雄性小鼠后雄鼠交配能力無(wú)明顯改變但是生育能力顯著下降。 實(shí)驗(yàn)二：人尿激酶免疫雄性小鼠對(duì)其精子功能的影響 目的：對(duì)人源uP

6、A分子免疫后雄性小鼠的附睪尾精子進(jìn)行各項(xiàng)檢測(cè)，評(píng)價(jià)免疫對(duì)雄性小鼠精子功能的影響。 方法：動(dòng)物分組和處理參照第一部分。以人源uPA免疫雄性小鼠3次后，檢測(cè)其性腺器官指數(shù)和精子功能（活動(dòng)率、存活率、低滲腫脹率、精子密度、爬高試驗(yàn)、uPA誘導(dǎo)產(chǎn)生趨化運(yùn)動(dòng)精子數(shù)、體外受精率等）各項(xiàng)指標(biāo)的改變。 結(jié)果：①性腺臟器指數(shù)：各組雄鼠性腺臟器指數(shù)無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；②精子存活率：uPA低、中、高劑量免疫組雄鼠附睪尾精子存活率比對(duì)

7、照組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；③精子活動(dòng)率：uPA低、中、高劑量免疫組雄鼠附睪尾精子活動(dòng)率比對(duì)照組顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；④精子低滲腫脹率：uPA低劑量免疫組雄鼠附睪尾精子低滲腫脹率比對(duì)照組明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而uPA中、高劑量免疫組附睪尾精子低滲腫脹率與對(duì)照組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；⑤精子密度：uPA低、中、高劑量免疫組雄鼠附睪尾精子密度比對(duì)照組明顯降低，差

8、異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；⑥精子爬高試驗(yàn)：各組雄鼠附睪尾精子爬高試驗(yàn)中爬高距離相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；⑦uPA誘導(dǎo)產(chǎn)生趨化運(yùn)動(dòng)精子數(shù)：uPA中、高劑量免疫組雄鼠附睪尾精子經(jīng)uPA誘導(dǎo)產(chǎn)生趨化運(yùn)動(dòng)精子數(shù)明顯減少（P＜0.05），而低劑量免疫組沒(méi)有明顯改變（P＞0.05）；⑧體外受精率：uPA低、中、高劑量免疫組雄鼠附睪尾精子體外受精率比對(duì)照組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），免疫劑量的高低對(duì)體外受精率沒(méi)有明