通陽益氣法對心肌梗死大鼠促血管新生作用及MEK-ERK信號通路的影響.pdf

1、研究目的：
　　通過建立心肌梗死大鼠模型，從形態(tài)學(xué)（HE染色，CD34染色切片）、炎癥因子（IL-6）、生長因子（TGF-β，VEGF，bFGF）、信號通路（MEK/ERK通路）多方面進行研究，觀察通陽益氣法促血管新生的作用和機制。
　　研究方法：
　　選用健康純種SPF級SD雄性大鼠80只，飼養(yǎng)于SPF屏障環(huán)境。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，結(jié)扎左冠狀動脈制備心肌梗死模型。將造模成功者隨機分為通陽益氣組（T）、蔥白組（C）、黃芪

2、組（H）、麝香保心丸組（S）、模型組（M），每組10只，另設(shè)假手術(shù)組(J)10只。術(shù)后第三天開始灌胃給藥，藥物干預(yù)28天后抽血、取材。應(yīng)用HE染色觀察梗死邊緣區(qū)的病理變化，CD34免疫組化染色檢測心肌梗死邊緣區(qū)微血管數(shù)量及微血管密度；放射免疫法檢測血清IL-6、TGF-β的含量；Western blot檢測心肌梗死邊緣區(qū) VEGF、bFGF、p-MEK、p-ERK的蛋白表達(dá)水平；熒光定量 PCR檢測心肌梗死邊緣區(qū)VEGF、bFGF、p-

3、MEK、p-ERK的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.對心肌梗死大鼠血管新生組織形態(tài)的影響 HE染色顯示，模型組心肌細(xì)胞廣泛水腫，梗死灶可見心肌纖維溶解，纖維組織增生、炎性細(xì)胞灶性浸潤，組織局部壞死。蔥白組、黃芪組表現(xiàn)為心肌細(xì)胞壞死較模型組少見，炎細(xì)胞浸潤，纖維組織增生少見。通陽益氣組、麝香保心丸組大多數(shù)心肌細(xì)胞無異常，可見炎性細(xì)胞浸潤，無明顯纖維增生。假手術(shù)組心肌細(xì)胞未見明顯異常，無纖維組織增生及炎細(xì)胞浸潤。CD34

4、染色后檢測心肌梗死邊緣區(qū)微血管數(shù)量（MVC）和微血管密度（MVD）顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠MVD值明顯升高（p＜0.01）；與模型組比較，通陽益氣組、蔥白組、黃芪組、麝香保心丸組MVD數(shù)值明顯升高(p＜0.01)；與麝香保心丸組比較，通陽益氣組MVD數(shù)值無統(tǒng)計學(xué)差異（p＞0.05）；與通陽益氣組比較，蔥白組、黃芪組MVD數(shù)值均明顯降低（p＜0.01）。
　　2.心肌梗死大鼠血清IL-6、TGF-β的含量與模型組比較，通陽益

5、氣組、蔥白組、麝香保心丸組IL-6水平均明顯降低(p＜0.01)，黃芪組IL-6水平亦降低(p＜0.05)；與麝香保心丸組比較，通陽益氣組、蔥白組IL-6水平降低(p＜0.05)；而通陽益氣組與蔥白組相比較，IL-6水平無統(tǒng)計學(xué)差異（p＞0.05)。
　　與模型組比較，蔥白組TGF-β水平明顯升高(p＜0.01)，通陽益氣組、麝香保心丸組TGF-β水平亦升高(p＜0.05)；而通陽益氣組與麝香保心丸組、蔥白組分別進行比較，TGF-

6、β水平無統(tǒng)計學(xué)差異（p＞0.05)。
　　3.對大鼠缺血心肌VEGF、bFGF的影響與模型組比較，各藥物干預(yù)組VEGF/actin比值明顯升高(p＜0.01)，VEGF蛋白表達(dá)增加，VEGF mRNA擴增倍數(shù)明顯升高（通陽益氣組、麝香保心丸組p＜0.01，黃芪組、蔥白組p＜0.05）；與麝香保心丸組比較，余治療組VEGF/actin比值、VEGF mRNA擴增倍數(shù)均明顯降低(p＜0.01)，VEGF蛋白表達(dá)減少；與通陽益氣組比較，

7、蔥白組、黃芪組 VEGF/actin比值均降低(蔥白組 p＜0.01，黃芪組 p＜0.05)，VEGF蛋白表達(dá)減少，黃芪組VEGF mRNA擴增倍數(shù)明顯降低(p＜0.01)，而蔥白組無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05）。
　　與模型組比較，通陽益氣組、麝香保心丸組bFGF/actin灰度
　　比值明顯升高(p＜0.01)，bFGF蛋白表達(dá)增加，蔥白組、黃芪組bFGF/actin比值無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)，而各藥物干預(yù)組bFGF

8、 mRNA擴增倍數(shù)明顯升高(p＜0.01)；與麝香保心丸組比較，通陽益氣組bFGF/actin比值無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)，然bFGF mRNA擴增倍數(shù)明顯降低(p＜0.01)；通陽益氣組比較，蔥白組、黃芪組bFGF mRNA擴增倍數(shù)均降低(蔥白組p＜0.01，黃芪組p＜0.05)。
　　4.對大鼠缺血心肌p-MEK、p-ERK的影響與模型組比較，蔥白組、通陽益氣組、麝香保心丸組p-MEK/actin比值均明顯升高(p＜0.0

9、1)，p-MEK蛋白表達(dá)增加，p-MEK mRNA擴增倍數(shù)亦明顯升高(p＜0.01)；與麝香保心丸組比較，通陽益氣組p-MEK/actin比值、p-MEK mRNA擴增倍數(shù)均無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)，蔥白組p-MEK/actin比值無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)，p-MEK mRNA擴增倍數(shù)明顯降低(p＜0.01)；與通陽益氣組相比較，黃芪組p-MEK/actin比值明顯降低(p＜0.01)，p-MEK蛋白表達(dá)減少，而蔥白組p-MEK

10、/actin比值無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)，p-MEK mRNA擴增倍數(shù)明顯降低(p＜0.01)。
　　與模型組比較，各藥物干預(yù)組p-ERK/actin比值、p-ERK
　　mRNA擴增倍數(shù)均明顯升高(p＜0.01)，p-ERK蛋白表達(dá)增加；與麝香保心丸組比較，其他用藥組p-ERK/actin比值明顯降低（黃芪組、蔥白組p＜0.01，通陽益氣組p＜0.05)，p-ERK蛋白表達(dá)減少，p-ERK mRNA擴增倍數(shù)明顯降低（蔥

11、白組p＜0.05，通陽益氣組、黃芪組p＜0.01)；與通陽益氣組相比較，黃芪組 p-ERK/actin比值明顯降低(p＜0.01)，p-ERK蛋白表達(dá)減少，而p-ERK mRNA擴增倍數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)，蔥白組與通陽益氣組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　通陽益氣法能增加心肌梗死邊緣區(qū)新生血管數(shù)目，對缺血心肌具有促血管新生作用，其效果優(yōu)于單純運用黃芪或蔥白。
　　通陽益氣法可降低IL-6水

12、平，抑制炎癥反應(yīng)，保護損傷的內(nèi)皮細(xì)胞，并能升高 TGF-β水平。其改善心肌缺血，促進血管新生的作用可能與調(diào)節(jié)IL-6水平、提高TGF-β含量有關(guān)。
　　通陽益氣法可促進血管新生的重要因子 VEGF、bFGF的表達(dá)，比單純運用蔥白或黃芪效果要好，說明通陽益氣法具有一定的優(yōu)勢，且其促血管新生作用可能與促進VEGF、bFGF的表達(dá)有關(guān)。
　　通陽益氣法能明顯提高缺血心肌中p-MEK及p-ERK的表達(dá)量，其促血管新生的作用機制可能在

13、于提高心肌中相關(guān)生長因子，激活MEK/ERK通路促進內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移而實現(xiàn)了血管新生。
　　通陽益氣法具有較好的促血管新生作用，效果優(yōu)于單用蔥白或黃芪。其能有效地抑制炎性因子的分泌，促進內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，發(fā)揮中醫(yī)藥整體調(diào)節(jié)、多靶點的作用特點，為通陽益氣法臨床治療應(yīng)用提供了部分實驗依據(jù)。但其對部分指標(biāo)的影響略遜于麝香保心丸，不排除與實驗過程中的誤差、未能顧全實驗影響因素有關(guān)，畢竟麝香保心丸促血管新生作用的研究已經(jīng)相當(dāng)成熟。這些都有