人臍血單個核細胞移植在心肌梗死大鼠中的促新生血管作用.pdf

1、本文主要探索臍血單個核細胞移植后在大鼠心臟梗死周邊區(qū)促新生血管作用以及VEGF-A的表達變化，并相應(yīng)地觀察急性心肌梗死大鼠心功能的改變。同時，本研究也驗證了臍血單個核細胞作為干細胞治療的一種重要細胞來源的可行性和相應(yīng)優(yōu)點。 研究目的： 1.研究急性心肌梗死大鼠在人臍血單個核細胞移植后心臟梗死周邊區(qū)毛細血管增生的改變。 2.研究臍血單個核細胞移植后大鼠心臟VEGF的表達變化及特點。 3.研究人臍血單個核細胞

2、移植對急性心肌梗死大鼠與心功能改善的作用及其應(yīng)用于急性心肌梗死的可行性。 研究材料與方法： 1.30份臍血均來自中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院產(chǎn)科，經(jīng)6％羥乙基淀粉(賀斯)及1.077g/1ficoll-paque分離液分離出臍血單個核細胞。CD34陽性細胞是較原始的細胞，能向多種成熟細胞分化，包括心肌細胞和毛細血管內(nèi)皮細胞等，移植前用流式細胞儀分析CD34陽性細胞含量。另外，為明確移植細胞的去向，移植前用BrdU標(biāo)記細胞，Brd

3、U可以代替胸腺嘧啶在DNA合成期攝取，整合到分裂細胞DNA中，移植后用抗BrdU免疫組化染色檢測。 2.Wistar雄性大鼠75只(購自中山大學(xué)動物中心)隨機分為：移植組(急性心肌梗死+細胞移植)30只、對照組(急性心肌梗死)30只和假手術(shù)組15只。按開胸結(jié)扎前降支近段的方法建立急性心肌梗死模型，移植組梗死周邊區(qū)心肌內(nèi)注入臍血單個核細胞2×105/μL，對照組同一部位注入等量培養(yǎng)基，假手術(shù)組開胸，穿針過線，不結(jié)扎。 3.

4、移植后4周用左心導(dǎo)管及多導(dǎo)生理記錄議進行心功能檢測，以及用免疫組化方法行心臟梗死周邊區(qū)毛細血管密度測定及BrdU陽性細胞檢測；在移植后第4天，第7天，第14天，第28天分別對對照組和移植組取材用RT-PCR法進行VEGF的mRNA表達半定量分析。對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果： 1.血流動力學(xué)檢測顯示：與對照組相比，移植組LVEDP和HR顯著下降(P＜0.05)，±dp/dtmax則明顯增快(P＜0.05)，均提示移植

5、組大鼠心功能得到改善。 2.免疫組化染色結(jié)果可見：移植組有BrdU陽性細胞存在，提示臍血單個核細胞在移植區(qū)存活；抗Ⅷ因子免疫組化染色示梗死周邊區(qū)平均血管密度(a-MVD)明顯增加，移植組為6.6±0.6個/HP，對照組為2.9±0.4個/HP，兩組比較差異有顯著性(P＜0.01)。 3.對照組和移植組大鼠心肌以表達VEGF164和VEGF188為主，VEGF120均呈微弱表達。移植組VEGF164和VEGF188表達于第

6、7天明顯增加，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，并持續(xù)表達至28天。對照組于第14天和第28天已基本不表達。 結(jié)論： 1.人臍血單個核細胞移植于急性心肌梗死大鼠后有臍血干細胞存活，并且證實了移植組心功能較對照組明顯改善。從而可見臍血單個核細胞移植應(yīng)用于治療急性心肌梗死的可行性。 2.急性心肌梗死大鼠在人臍血單個核細胞移植后毛細血管增生得到促進，并伴有心功能的改善，提示毛細血管增生可能是心功能改善的重