白藜三醇對兔心肌梗死后血管新生的誘導作用.pdf

1、目的：本實驗首先建立兔急性心肌梗死模型，主要探討術后白藜三醇慢性給藥對兔心肌梗死后新生血管的誘導作用及可能機制。
　　 方法：32只新西蘭白兔為實驗對象，隨機分為假手術組、手術對照組、消心痛組、白藜三醇組，每組8只。假手術組中LAD僅穿線不結扎，其余兔通過結扎LAD建立心肌梗死模型。術后分別給予不同的藥物干預：假手術組及手術對照組予7％酒精3ml，白藜三醇組予白藜三醇3mg/kg（溶于7％酒精3ml），消心痛組予消心痛2.4mg

2、/kg（溶于7％酒精3ml），均灌胃，1次/天。兩周后，分別取各組存活兔心肌梗死區(qū)、非梗死區(qū)、梗死邊緣區(qū)心肌組織標本。HE染色、Masson染色法分別觀察梗死區(qū)、非梗死區(qū)心肌組織形態(tài)學變化并采集圖像，應用Image pro plus6.0圖像分析系統(tǒng)計算各組心肌梗死面積；應用免疫組化染色法檢測各組梗死邊緣區(qū)CD34、IGF-1、bFGF的表達，并以CD34標記血管內皮，在顯微鏡400×視野下，計數(shù)MVD； Western-blot法檢測

3、各組梗死邊緣區(qū)IGF-1、bFGF蛋白表達水平；RT-PCR檢測各組梗死邊緣區(qū)VEGFmRNA表達水平。
　　 結果：1一般情況：32只兔成功制備心梗模型并存活至治療結束的有27只，總存活率為84.4％。術中及術后共有5只兔死亡：術中1只死于氣胸，1只死于術后6小時內，1只死于術后感染（消心痛組）、2只死于心衰惡病質（手術對照組及白藜三醇組各1只）。
　　 2光鏡結果：①HE染色結果顯示假手術組心肌細胞橫紋及閏盤清晰，纖

4、維結構清楚、排列整齊、無炎性細胞浸潤。未梗死部位的心肌細胞排列整齊緊密，肌纖維走向明晰，細胞分界清楚，胞核橢圓形位于中央，胞質呈嗜酸性均勻染色，而梗死區(qū)室壁變薄，外膜至內膜間心肌纖維數(shù)量減少，肉芽組織、纖維組織和脂肪組織增生明顯，各種細胞排列紊亂，少量散在的心肌細胞。②Masson染色結果示梗死部位纖維結締組織呈藍色，正常心肌纖維呈紫紅色或深紅色。
　　 3心肌梗死面積測算結果：白藜三醇組、消心痛組梗死面積明顯小于手術對照組(P

5、＜0.05)，白藜三醇組與消心痛組之間比較無統(tǒng)計學意義。
　　 4免疫組化染色測定各組心肌梗死邊緣區(qū)MVD、IGF-1、bFGF結果：CD34、IGF-1、bFGF三者陽性表達在顯微鏡下呈黃褐色。白藜三醇組、消心痛組較假手術組、手術對照組能明顯增加MVD及IGF-1、bFGF的表達(P＜0.05)；手術對照組較假手術組MVD、IGF-1表達增加(P＜0.05)，但bFGF表達兩組之間無明顯變化(P＞0.05)；白藜三醇組IGF-

6、1的表達水平較消心痛組明顯增加(P＜0.05)，MVD、bFGF兩組之間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 5 Western-Blot測定各組心肌梗死邊緣區(qū)IGF-1、bFGF結果：白藜三醇組、消心痛組較假手術組、手術對照組能明顯增加IGF-1、bFGF的表達（P＜0.05）；手術對照組較假手術組、白藜三醇組較消心痛組IGF-1表達均增加(P＜0.05)，但手術對照組較假手術組、白藜三醇組較消心痛組bFGF表達無明顯變化(P

7、＞0.05)。
　　 6 RT-PCR測定各組心肌梗死邊緣區(qū)VEGF-AmRNA表達水平：白藜三醇組、消心痛組同假手術組、手術對照組比較明顯增加(P＜0.05)，手術對照組較假手術組明顯增加(P＜0.05)，差異均有統(tǒng)計學意義；白藜三醇組與消心痛組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 7相關分析結果：四組兔心肌梗死邊緣區(qū)IGF-1、bFGF免疫組化結果與MVD均成正相關（r=0.913，P＜0.01；r=0.9

8、69，P＜0.01）；MIS與MVD成負相關(r=-0.551,P＜0.05)。
　　 結論：1.在缺血缺氧環(huán)境下，機體可啟動心肌梗死邊緣區(qū)的血管生成，但作用強度有限。
　　 2.白藜三醇與消心痛均可促進心肌梗死后邊緣區(qū)血管生成，有利于冠脈側枝循環(huán)的建立，減小心梗面積。
　　 3.白藜三醇誘導血管發(fā)生與多種血管生長因子表達增多相關，且其作用機制與消心痛不完全相同，其中介導IGF-1高表達可能是其重要作用機制之一。