N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酸試劑盒制備及其臨床應用研究.pdf

1、本文對N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酸試劑盒制備及其臨床應用進行了研究。本研究分為兩個部分：
　　 第一部分：NAG試劑盒制備。
　　 目的：制備符合臨床檢測要求的NAG測定液體試劑盒。
　　 方法：采用VRA-NAG為底物,選擇合適的緩沖液體系、底物濃度及表面活性劑,制備NAG測定液體試劑盒,并對其線性、精密度、準確度、穩(wěn)定性和抗干擾性等性能進行評價。
　　 結(jié)果：NAG活性在100 mmol／L檸檬酸

2、緩沖液pH5.8時最大,pH在5.0-6.6之間相差不大,考慮到底物穩(wěn)定性,選用緩沖液pH5.0作為NAG測定最佳值。根據(jù)米氏方程測得Km值為0.32 mmol／L,因此,將NAG測定的底物濃度定為Km值的10倍量3.2 mmol／L作為NAG測定試劑的最佳底物濃度。底物溶液中添加0.1％的Tween20和0.1％的BSA,有助于底物溶解及穩(wěn)定。NAG活性在0-360 U／L范圍內(nèi)線性良好。批內(nèi)CV低值標本為1.74％,高值標本為0.8

3、6％；批間CV低值標本為3.21％,中值標本為1.65％,高值標本為1.08％。平均回收率為103.7％。試劑開瓶7天和保存一年,穩(wěn)定性均較好。維生素C濃度在50 mg／L以下對本法測定結(jié)果基本無干擾,高濃度將產(chǎn)生負干擾,使測定結(jié)果偏低。乳酸<0.9 g／L、丙酮酸<20 mg／L、酒石酸<17 mg／L、尿酸<0.13 g／L、葡萄糖<9 g／L、膽紅素<4.6 mg／L時,對本法測定結(jié)果無顯著影響。
　　 結(jié)論：本研究研制的

4、NAG測定試劑盒可靈敏、準確、快速地對人尿液中的NAG活性進行測定,試劑盒經(jīng)線性、精密度、準確度、穩(wěn)定性和抗干擾性的相關(guān)比較檢測,結(jié)果符合臨床檢測要求。
　　 第二部分：NAG試劑盒在糖尿病腎病診斷中的臨床應用。
　　 目的：探討尿NAG對糖尿病早期腎損害的診斷價值。
　　 方法：檢測糖尿病無腎病組、糖尿病合并腎病組及正常對照組尿NAG活性。
　　 結(jié)果：糖尿病無腎病組NAG值為20.5±16.6 U／L

5、,糖尿病有腎病組NAG值為40.6±13.4 U／L,均較對照組7.2±2.8 U／L明顯升高(P<0.05),糖尿病有腎病組較糖尿病無腎病組尿NAG值明顯升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：尿NAG檢測對糖尿病腎損害的早期診斷具有一定的價值。
　　 本研究表明：⑴研制的NAG測定試劑金可靈敏、準確、快速地對人尿液中的NAG活性進行測定。⑵制備的NAG測定試劑盒,經(jīng)線性、精密度、準確度、穩(wěn)定性和抗干擾性的相關(guān)比較檢測,結(jié)