棉鈴蟲N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力調(diào)控的研究.pdf

1、以棉鈴蟲的蛹為材料，通過硫酸銨沉淀分級分離、SephadexG-200分子篩柱層析和DEAE-32離子交換柱層析純化，獲得聚丙烯酰胺凝膠電泳單一純的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶酶制劑。酶分子的分子量為89.3kd。酶的最適pH為5.6，最適溫度為55℃。該酶在pH4～8區(qū)域較穩(wěn)定，而在pH＞8能迅速失活；在45℃以下處理30min，酶活力保持穩(wěn)定，高于45℃，酶穩(wěn)定性較差，很快失活。 研究金屬離子、有機溶劑和產(chǎn)物類似物等效

2、應物對棉鈴蟲N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影響。其中醇類對酶有先揚后抑作用。除了Hg2+對酶的抑制作用是一種不可逆過程，其他幾種效應物對酶的抑制作用是一種可逆過程，Cu2+、葡萄糖和半乳糖是酶的混合型抑制劑。Zn2+、Al3+、丙酮、二甲亞砜、二氧六環(huán)、二甲基甲酰胺和果糖對酶的抑制作用屬于競爭性抑制。pb2+和蔗糖對酶的抑制作用屬于非競爭性抑制。產(chǎn)物NAG對酶的抑制作用屬于反競爭性抑制。 化學修飾研究結(jié)果表明：色氨酸的

3、吲哚基、組氨酸的咪唑基、酸性氨基酸的β-羧基和賴氨酸的ε-氨基是酶的必需基團。以動力學方法測定酶活性功能基團的解離性質(zhì)，測得酶活性中心解離常數(shù)pKe為4.59；解離熱焓△H°為1.04kcal/mol，表明與酶活性有關(guān)的可解離基團是β-羧基。 以熒光發(fā)射光譜研究酶經(jīng)不同濃度鹽酸胍變性后的分子構(gòu)象變化。棉鈴蟲N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶在不同濃度胍變性后，341nm熒光發(fā)射峰逐漸紅移至351nm，說明酶分子充分伸展，變性完全