油茶三萜皂苷的分離純化及生物活性研究.pdf

1、本論文以市售油茶皂苷粗品為試驗(yàn)材料，旨在分離純化出油茶皂苷單體，并鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)；研究油茶皂苷對(duì)植物病原真菌的抑制活性和作用機(jī)制，以及對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和小鼠H22腫瘤的抑制作用。主要結(jié)果如下：
　　1、聯(lián)合使用AB-8大孔樹脂、正相硅膠H、LH-20凝膠、ODS-C18OPN柱、Pre-HPLC等分離純化油茶皂苷，得到4個(gè)油茶皂苷單體化合物和2個(gè)黃酮類化合物。經(jīng)HPLC-ESI-MS2分析得知，4個(gè)油茶皂苷單體化合物中，分

2、子量為1202.27的皂苷產(chǎn)生的二級(jí)碎片為1022、890，推測(cè)其為camelliasaponin B1；分子量為1216.53的皂苷產(chǎn)生的二級(jí)碎片為1036、904，推測(cè)其為oleiferasaponin A1；分子量為1246.59，1188.58的皂苷推測(cè)其分子式為C60H94O27和C58H92O25。2個(gè)黃酮類化合物的分子量分別為286.2和330.2，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品鑒定為山奈酚和2甲基黃酮醇。
　　2、采用牛津杯法測(cè)定了純

3、化后的四類油茶皂苷（即總皂苷F0、高極性皂苷F1、中極性皂苷F2、低極性皂苷F3）對(duì)玉米小斑病菌和水稻穎枯病菌的抑制作用，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組皂苷均對(duì)玉米小斑病菌表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑制作用，其中5mg/mL的F2對(duì)玉米小斑病菌的抑菌直徑達(dá)到37.47mm；玉米小斑病菌經(jīng)250μg/mL的F0處理24h后，光學(xué)顯微鏡觀察其菌絲粗細(xì)不均，末端菌絲膨大畸形，菌絲分枝增多且較短呈囊泡狀，透射電子顯微鏡觀察其細(xì)胞膜系統(tǒng)遭受不可修復(fù)的破壞，無完整的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，

4、從而阻礙了菌絲的正常生長(zhǎng)。
　　3、采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測(cè)定了粗品皂苷、F0、F1、F2和F3體外抑制人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的活性，IC50值分別為63.33μM、10.61μM、36.83μM、9.44μM、29.84μM；應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定了F0、F2對(duì)MCF-7細(xì)胞周期的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)F0、F2均可使細(xì)胞周期停滯在G1/S期，且阻礙效應(yīng)與劑量呈正相關(guān)，從而阻礙了MCF-7細(xì)胞的正常生長(zhǎng)；F0和F2作用MCF-7細(xì)胞

5、24h后，侵襲實(shí)驗(yàn)表明MCF-7細(xì)胞的侵襲能力顯著降低。與對(duì)照相比，F(xiàn)0、F2在4μM和6μM劑量組時(shí)的細(xì)胞轉(zhuǎn)移率分別為72.92％和41.67%、68.75%和37.50%。
　　4、采用小鼠肝癌腹水H22細(xì)胞株皮下移植法建立了荷瘤昆明小鼠模型。F0和F2在10mg/kg劑量時(shí)均能顯著抑制小鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)，與對(duì)照組相比，腫瘤抑制率分別達(dá)到76.80%和50.25%，均達(dá)到極顯著差異（P<0.01）。通過對(duì)比處理組與對(duì)照組小鼠體質(zhì)