益元康方中西洋參總皂苷、總多糖提取純化工藝研究.pdf

1、目的：近幾年國(guó)內(nèi)對(duì)西洋參做了大量研究，證明西洋參具有廣泛的生物學(xué)活性，主要有效成分為西洋參總皂苷、多糖等化合物，可作用于多種免疫活性細(xì)胞，促進(jìn)某些細(xì)胞因子的分泌來進(jìn)一步發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。本課題將益元康方中具有生物活性的西洋參總皂苷、總多糖等成分進(jìn)行提取純化，為益元康方進(jìn)一步篩選有效組分以及免疫調(diào)節(jié)作用的研究打下基礎(chǔ)。
　　方法：在藥材質(zhì)量控制中，加80％乙醇50ml，加熱回流提取3次，每次1h提取西洋參中總皂苷，以香草醛冰乙酸為顯

2、色劑，采用紫外可見分光光度法測(cè)定總皂苷含量。加水50ml，水浴加熱回流提取3次，每次1h，濾過，合并濾液，濃縮至50ml，精密量取10ml，加入乙醇30ml，搖勻，4℃靜置24h，取出，離心（4000r?min-1,10min），傾去上清液，沉淀加水溶解，加入等體積的Sevag試劑（正丁醇：氯仿=1:4）除蛋白2次，得到總多糖供試品，采用蒽酮硫酸法顯色法測(cè)定總多糖含量。通過對(duì)12批西洋參藥材進(jìn)行指紋圖譜構(gòu)建，對(duì)比對(duì)照品的保留時(shí)間，對(duì)7個(gè)

3、特征峰進(jìn)行化學(xué)指認(rèn)，運(yùn)用指紋圖譜參數(shù)共有峰和相似度進(jìn)行分析，并對(duì)圖譜進(jìn)行聚類分析。在優(yōu)選西洋參總皂苷提取工藝中，以西洋參總皂苷、人參皂苷Rg1、Re、Rb1為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)篩選醇提次數(shù)，采用均勻?qū)嶒?yàn)以及多指標(biāo)層次分析法優(yōu)選出西洋參總皂苷醇提工藝；以西洋參總多糖為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)、正交試驗(yàn)研究了西洋參總多糖提取工藝。在純化工藝研究中，通過對(duì)不同類型大孔吸附樹脂吸附及解吸性能的考察，優(yōu)選出最佳樹脂，并分別采用單因素試驗(yàn)、均勻試驗(yàn)和

4、單因素試驗(yàn)、正交試驗(yàn)優(yōu)選出西洋參總皂苷和總多糖的純化工藝參數(shù)。
　　結(jié)果：（1）藥材質(zhì)量控制中，西洋參中總皂苷含量為6.29%，總多糖含量為3.50%，人參皂苷Rg1、Re、Rb1總含量均大于藥典規(guī)定的2.0%，質(zhì)量可控。并建立了西洋參的HPLC指紋圖譜，標(biāo)出了30個(gè)共有峰，相似度在0.925～0.995，12批藥材聚成4類。（2）西洋參總皂苷醇提工藝為：采用12倍量的85%乙醇提取兩次，每次160min，合并提取液，濾過，濃縮。

5、西洋參總多糖提取工藝為：液料比10:1，提取3次，每次1.5h。（3）分別選用D101、HPD600作為純化西洋參總皂苷和總多糖的最佳樹脂，總皂苷優(yōu)選的純化工藝為：上樣濃度為14.84mg?ml-1，上樣流速為1.0ml?min-1，徑高比1:10，水洗體積3BV，洗脫劑為80%乙醇，洗脫劑用量為200ml，西洋參總皂苷純度為57.45%?？偠嗵堑募兓に嚍椋荷蠘訚舛葹?.74 mg?ml-1，PH為8.0，上樣流速為2.0 ml?mi