竹節(jié)參總皂苷提取純化工藝及其抗腫瘤活性的初步研究.pdf

1、竹節(jié)參(Rhizoma Panacis Japonici)為五加科(Araliaceae)植物竹節(jié)參(Panax japonicus C.A.Mey.)的干燥根莖，屬土家族珍稀藥物資源。竹節(jié)參含多種三萜皂苷、多糖、豐富的氨基酸及微量元素等活性物質(zhì)，兼具北藥人參滋補(bǔ)強(qiáng)壯和南藥三七活血化瘀之功效，是一種藥食兩用的天然植物，在臨床治療及保健功能上均具有廣泛的應(yīng)用價值。目前對竹節(jié)參的研究主要集中在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物的開發(fā)上，竹節(jié)參總皂苷（T

2、otal saponins of Rhizoma Panacis Japonici，TsPJ）微波提取、大孔吸附樹脂純化工藝研究尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，而其體外抗腫瘤活性方面罕有文獻(xiàn)報(bào)道。為了充分利用竹節(jié)參資源，開發(fā)以TsPJ為主要成分的新的藥物和新的中成藥制劑，本課題建立了TsPJ的含量測定方法，提出了適宜于TsPJ提取和純化的最佳工藝條件，并對其體外抗腫瘤活性作了初步的探索。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1．TsPJ的含量測定

3、r>　　 選用人參皂苷Re為標(biāo)準(zhǔn)品，采用分光光度法，以5％冰乙酸-香草醛溶液和高氯酸為顯色劑，在552nm處測定吸光度。以人參皂苷Re的量(μg)為橫坐標(biāo)，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)計(jì)算得回歸方程為Y=0.0046X-0.0013(R2=0.9997)，在40.48～202.40μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，以此計(jì)算TsPJ的含量。經(jīng)方法學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在90min內(nèi)吸收值穩(wěn)定，RSD為1.42%，精密度和重現(xiàn)性良好，RSD分

4、別0.75%和1.51%：平均回收率為100.46%(n=5)，RSD為1.06%。此法簡便靈敏，重現(xiàn)性良好，方法可靠，可作為竹節(jié)參總皂苷的定量方法。
　　 2．TsPJ提取工藝的優(yōu)選
　　 以TsPJ轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo)，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，運(yùn)用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，篩選最佳微波提取工藝；并將其與加熱回流提取法及超聲提取法進(jìn)行比較。結(jié)果表明，以80%乙醇為提取溶劑，微波功率400W，料液比1：18，提取4次，每次提取5min，T

5、sPJ的轉(zhuǎn)移率可高達(dá)97.77%。微波提取工藝具有效率高、時間短、能耗低、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，為TsPJ的工業(yè)化生產(chǎn)和新藥開發(fā)提供了依據(jù)。
　　 3．TsPJ純化工藝的優(yōu)選
　　 采用靜態(tài)吸附和動態(tài)吸附考察相結(jié)合的方法，篩選了5種不同性質(zhì)的大孔樹脂，最終初步確立了D-101型大孔樹脂分離TsPJ的純化工藝：上樣濃度為0.2g生藥.mL-，PH值為6，徑高比為1：10，以3BV70%乙醇溶液洗脫，吸附及洗脫流速均為1mL．min-

6、1。研究結(jié)果表明，未純化前總固物中總皂苷的含量為24.36%，純化后總固物中的TsPJ含量為82.53%，精制度達(dá)338.81%，且轉(zhuǎn)移率可達(dá)88.02%。從精制度、轉(zhuǎn)移率等方面考慮，該工藝適宜于TsPJ的分離及純化。
　　 4．TsPJ對肝癌HepG2細(xì)胞凋亡作用的考察
　　 采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)還原法檢測不同濃度的TsPJ對肝癌HepG2細(xì)胞增殖的作用；流式細(xì)胞儀分析腫瘤細(xì)胞凋亡率。結(jié)果表明，TsPJ可抑制肝