補益營衛(wèi)方對衰老人皮膚成纖維細胞增殖周期影響的實驗研究.pdf

1、目的：觀察補益營衛(wèi)方藥對體外培養(yǎng)的衰老人皮膚成纖維細胞（HSF）的增殖作用；觀察不同濃度補益營衛(wèi)方含藥血清作用衰老的HSF后的增殖作用；探討其可能的作用機制。
　　方法：
　　1細胞培養(yǎng)：購買人皮膚成纖維細胞株，體外培養(yǎng)傳代至人皮膚成纖維細胞老化。
　　2含藥血清的制備：將健康清潔級雄性 SD大鼠60只，隨機分為3組，即補益營衛(wèi)低劑量組、補益營衛(wèi)中劑量組、補益營衛(wèi)高劑量組，每組20只。各組大鼠分別采取灌胃給藥法灌入不同

2、濃度的藥液，按照通法采血，分離、滅活血清，分別配制含10％各血清的DMEM完全培養(yǎng)液。
　　3人皮膚二倍體成纖維細胞的分組：年輕對照組，老齡對照組，補益營衛(wèi)高、中、低劑量組，并加入相應的血清進行干預處理。
　　4細胞增殖動力學檢測：通過細胞計數(shù)法計數(shù)并繪制細胞增殖生長曲線圖。觀察各組 HSF細胞數(shù)量的變化。
　　5細胞周期測定：用流式細胞儀檢測細胞周期。
　　6細胞免疫化學檢測：采用細胞免疫化學法檢測各組細胞的P

3、CNA、c-Fos、c-Myc蛋白表達。
　　結(jié)果：
　　1 HSF生長曲線中，相同時間內(nèi)，各組細胞數(shù)由高到低分別是補益營衛(wèi)高、中、低劑量組，年輕對照組，老齡對照組。
　　2流式細胞術(shù)檢測細胞周期，各組細胞中S期細胞百分數(shù)由高到低分別是補益營衛(wèi)高、中、低劑量組，年輕對照組，老齡對照組。
　　3細胞免疫化學檢測：年輕對照組和老齡對照組的OD值相比有顯著性差異（P<0.05），表明 HSF已經(jīng)老化，進而進一步說明正常

4、人皮膚二倍體細胞經(jīng)歷一定次數(shù)的細胞分裂后，最終進入非增殖狀態(tài)，稱之為細胞衰老；補益營衛(wèi)各劑量組與老齡對照組的OD值相比（P<0.05），與年輕對照組的OD值相比（P<0.05），均有顯著性差異，說明補益營衛(wèi)方藥促進衰老人皮膚成纖維細胞增殖；補益營衛(wèi)中劑量與組補益營衛(wèi)低劑量組的OD值相比（P<0.05），補益營衛(wèi)高劑量組與補益營衛(wèi)中、低劑量組的OD值相比（P<0.05），均有顯著性差異，說明補益營衛(wèi)方高、中、低濃度間有顯著性差異（P<0.