強(qiáng)脈沖光照射對(duì)培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞的影響.pdf

1、皮膚老化分為自然老化和光老化。后者主要由日光中的紫外線照射引起，特別是長(zhǎng)波紫外線UVA的照射。對(duì)于光老化皮膚的治療經(jīng)歷了兩個(gè)階段：有創(chuàng)性治療和無創(chuàng)性治療，由于前者副作用較多，故其應(yīng)用逐漸減少。強(qiáng)脈沖光(IntensePulsedLightIPL)技術(shù)是近年來產(chǎn)生的一種治療光老化皮膚的新的無創(chuàng)性方法，在臨床研究中己證實(shí)能有效地改善光老化皮膚的許多癥狀，所以在臨床得以普遍應(yīng)用。在強(qiáng)脈沖光照射對(duì)皮膚光老化的研究方面，雖然取得了一定的成績(jī)，但也

2、存在分歧，并且以前的研究都是在正常組織和細(xì)胞上進(jìn)行。正常細(xì)胞與光老化細(xì)胞的情況相差甚遠(yuǎn)。在細(xì)胞生物學(xué)研究方面，目前文獻(xiàn)上還未見關(guān)于強(qiáng)脈沖光照射對(duì)細(xì)胞端粒影響的報(bào)道。
　　本實(shí)驗(yàn)旨在用UVA作為對(duì)照，觀察單次IPL照射對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖活性和培養(yǎng)細(xì)胞上清液中MMP-1的表達(dá)情況。多次IPL照射，對(duì)細(xì)胞老化指標(biāo)的影響。IPL照射對(duì)PUVA誘導(dǎo)的老化成纖維細(xì)胞的影響。從而更好的理解光老化的分子機(jī)制和IPL光子嫩膚機(jī)制。
　　實(shí)

3、驗(yàn)一：細(xì)胞分成7組，沒有任何照射的一組作為對(duì)照組，三組分別接受IPL5J/cm2,15J/cm2和20J/cm2照射，其它三組接受UVA9J/cm2,11J/cm2和13J/cm2照射。觀察不同劑量IPL和UVA照射后第二天細(xì)胞的形態(tài)和細(xì)胞的增殖活性，細(xì)胞上清液中MMP-1的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IPL照射后，細(xì)胞形態(tài)未見明顯改變，細(xì)胞增殖活性明顯增加，但不存在劑量依賴性，以臨床常用劑量15J/cm2組細(xì)胞活性最高。UVA照射后，細(xì)胞變圓

4、，皺縮，部分死亡，細(xì)胞活性下降，并且有劑量依賴性。UVA9J/cm2照射后，細(xì)胞活性大約在80％。IPL照射后,MMP-1的分泌水平下降，以IPL15J/cm2組下降最明顯。UVA照射后，MMP-1的分泌水平上升，但不存在劑量依賴性，以UVA9J/cm2照射后，水平最高。我們接著把細(xì)胞分成四組:即對(duì)照組，UVA9J/cm2照射組，IPL15J/cm2照射組和UVA9J/cm2+IPL15J/cm2照射組（成纖維細(xì)胞接受9J/cm2UVA

5、照射后隨即給予15J/cm2IPL照射）,觀察IPL照射能否降低UVA導(dǎo)致的MMP-1的上升。結(jié)果發(fā)現(xiàn)UVA照射后再進(jìn)行IPL照射，MMP-1的水平回復(fù)到接近正常水平。
　　實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞分成三組，一組未接受照射作為對(duì)照組，其它兩組分別接受IPL15J/cm2和UVA9J/cm2照射，每天一次，連續(xù)照射5天。在第6天，收集細(xì)胞，分別進(jìn)行β-半乳糖苷酶染色，細(xì)胞周期，細(xì)胞內(nèi)活性氧和端粒長(zhǎng)度的測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：連續(xù)5天的IPL照射后，β-

6、半乳糖苷酶染色和端粒長(zhǎng)度與正常對(duì)照相比，未見明顯變化（p>0.05）。細(xì)胞周期中G1期所占百分比下降，細(xì)胞內(nèi)活性氧下降（p<0.05）；連續(xù)5次的UVA照射后，與正常對(duì)照相比，β-半乳糖苷酶染色陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)增加，細(xì)胞周期中G1期所占百分比未見明顯變化，細(xì)胞內(nèi)活性氧上升和端粒長(zhǎng)度縮短（p<0.05）。
　　實(shí)驗(yàn)三：細(xì)胞分成三組：一組用非毒性的8-甲氧補(bǔ)骨脂素孵育細(xì)胞16-18小時(shí)，然后用UVA9J/cm2照射（PUVA組），一組

7、PUVA處理后，隨即進(jìn)行IPL15J/cm2照射，以后每天進(jìn)行一次，連續(xù)5天，即PUVA+IPL組，同時(shí)設(shè)正常對(duì)照組，除每天更換培養(yǎng)液后，未給予任何處理。在細(xì)胞處理后1，3，5天后用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性。在處理5天后，收集細(xì)胞進(jìn)行β-半乳糖苷酶染色，細(xì)胞內(nèi)活性氧和端粒長(zhǎng)度的測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：和對(duì)照組細(xì)胞相比，PUVA組和PUVA+IPL組β-半乳糖苷酶活性明顯增加。PUVA+IPL組β-半乳糖苷酶陽性成纖維細(xì)胞數(shù)明顯低于PUVA組(p<0

8、.05)。與對(duì)照組細(xì)胞活性相比，PUVA組和PUVA+IPL組的細(xì)胞活性呈時(shí)間依賴性下降，并且兩組之間未見明顯差別。與對(duì)照組細(xì)胞相比，PUVA處理組端粒長(zhǎng)度縮短，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平增加(p<0.05)，但與PUVA處理組相比，在PUVA處理后隨即給予多次的IPL照射可阻止端?？s短和降低細(xì)胞內(nèi)活性氧水平(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　?。?）IPL和UVA單次照射人皮膚成纖維細(xì)胞后，細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞活性和MMP-1的表達(dá)不同。U