牙周膜成纖維細胞-富血小板膠的合成及其成骨活性表達的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、組織工程技術(shù)是20世紀80年代后發(fā)展起來的新技術(shù),它為牙周組織再生提供了全新的治療方法。其基本原理是將體外培養(yǎng)的活細胞種植于細胞外基質(zhì)上,經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)再將這種細胞基質(zhì)復(fù)合體置入機體病損部位,形成新的具有原來形態(tài)、功能的相應(yīng)組織和器官從而達到修復(fù)創(chuàng)傷和重建的目的,所以構(gòu)建、優(yōu)化細胞基質(zhì)復(fù)合體是運用組織工程技術(shù)獲得牙周再生的先決條件。 目的:觀察富血小板膠(Platelet-Rich Plasma gel,PRP-gel)對人

2、牙周膜成纖維細胞增殖的影響;體外合成牙周膜成纖維細胞.富血小板膠(PDUFs/PRP-gel)并檢測這種基質(zhì)能否表達成骨活性,從而探討PDLFs/PRP-gel作為促牙周組織再生的基質(zhì)材料可行性,并對基質(zhì)在不同時間表達的成骨活性進行定量指標對比,優(yōu)化選擇,從而為PDLFs/-PRPgel基質(zhì)在促牙周組織再生的臨床應(yīng)用中確定基質(zhì)最佳植入時間提供實驗依據(jù)。 方法: 采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞(PDLs)并鑒定,取

3、第5~6代細胞用于實驗。通過二次離心法制備富血小板血漿(Platelet-Rich plasma,PRP):以四唑鹽比色法[3-(4,5-dimethylthiaz01.2-y1).2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]法檢測富血小板膠對人牙周膜成纖維細胞增殖的影響。 制備PDLFs/PRP-gel(實驗組)和PRP-gel(陰性對照組),在不同時間(4、6、8、10、11、14、15、16、

4、18、23、28d)用堿性磷酸酶(ALP)試劑盒檢測基質(zhì)內(nèi)ALP含量;用免疫組化法(Envision二步法)檢測基質(zhì)中骨涎蛋白(Bonesialoprotein,BSP)、骨橋蛋白(Osteopontin,OPN)含量。 鈣化結(jié)節(jié)的觀察:將第5~6代PDLFs用PRP-gel緩釋液不傳代培養(yǎng),倒置相差顯微鏡下見細胞結(jié)節(jié)狀聚集時行Von Kossa染色并記錄結(jié)節(jié)出現(xiàn)時間。 結(jié)果: (1)PRP-gel對人牙周膜成纖

5、維細胞增殖的影響: PRP-gel實驗組較對照組對人牙周膜成纖維細胞增殖作用更明顯,從第三天起有統(tǒng)計學(xué)差異。 (2)基質(zhì)內(nèi)ALP含量的檢測: 實驗組6d時ALP含量明顯增高,8~10d達到峰值(平臺期),11d后迅速下降,6~10d這三組與其他實驗組比較ALP含量的有統(tǒng)計學(xué)差異。 (3)基質(zhì)內(nèi)骨涎蛋白和骨橋蛋白含量的檢測: 實驗組骨橋蛋白在15~16d時表達明顯,與其他時間的實驗組比較有統(tǒng)計學(xué)差異

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