牙周膜成纖維細(xì)胞-富血小板膠的合成及其成骨活性表達的研究.pdf

1、組織工程技術(shù)是20世紀(jì)80年代后發(fā)展起來的新技術(shù)，它為牙周組織再生提供了全新的治療方法。其基本原理是將體外培養(yǎng)的活細(xì)胞種植于細(xì)胞外基質(zhì)上，經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)再將這種細(xì)胞基質(zhì)復(fù)合體置入機體病損部位，形成新的具有原來形態(tài)、功能的相應(yīng)組織和器官從而達到修復(fù)創(chuàng)傷和重建的目的，所以構(gòu)建、優(yōu)化細(xì)胞基質(zhì)復(fù)合體是運用組織工程技術(shù)獲得牙周再生的先決條件。 目的：觀察富血小板膠(Platelet-Rich Plasma gel，PRP-gel)對人

2、牙周膜成纖維細(xì)胞增殖的影響；體外合成牙周膜成纖維細(xì)胞.富血小板膠(PDUFs/PRP-gel)并檢測這種基質(zhì)能否表達成骨活性，從而探討PDLFs/PRP-gel作為促牙周組織再生的基質(zhì)材料可行性，并對基質(zhì)在不同時間表達的成骨活性進行定量指標(biāo)對比，優(yōu)化選擇，從而為PDLFs/-PRPgel基質(zhì)在促牙周組織再生的臨床應(yīng)用中確定基質(zhì)最佳植入時間提供實驗依據(jù)。 方法： 采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人牙周膜成纖維細(xì)胞(PDLs)并鑒定，取

3、第5～6代細(xì)胞用于實驗。通過二次離心法制備富血小板血漿(Platelet-Rich plasma，PRP)：以四唑鹽比色法[3-(4,5-dimethylthiaz01.2-y1).2,5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT]法檢測富血小板膠對人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖的影響。 制備PDLFs/PRP-gel(實驗組)和PRP-gel(陰性對照組)，在不同時間(4、6、8、10、11、14、15、16、

4、18、23、28d)用堿性磷酸酶(ALP)試劑盒檢測基質(zhì)內(nèi)ALP含量；用免疫組化法(Envision二步法)檢測基質(zhì)中骨涎蛋白(Bonesialoprotein，BSP)、骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)含量。 鈣化結(jié)節(jié)的觀察：將第5～6代PDLFs用PRP-gel緩釋液不傳代培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡下見細(xì)胞結(jié)節(jié)狀聚集時行Von Kossa染色并記錄結(jié)節(jié)出現(xiàn)時間。 結(jié)果： (1)PRP-gel對人牙周膜成纖

5、維細(xì)胞增殖的影響： PRP-gel實驗組較對照組對人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖作用更明顯，從第三天起有統(tǒng)計學(xué)差異。 (2)基質(zhì)內(nèi)ALP含量的檢測： 實驗組6d時ALP含量明顯增高，8～10d達到峰值(平臺期)，11d后迅速下降，6～10d這三組與其他實驗組比較ALP含量的有統(tǒng)計學(xué)差異。 (3)基質(zhì)內(nèi)骨涎蛋白和骨橋蛋白含量的檢測： 實驗組骨橋蛋白在15～16d時表達明顯，與其他時間的實驗組比較有統(tǒng)計學(xué)差異