雌激素對體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞MMP-1基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過研究雌激素對體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞MMP-1的mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響，探討雌激素減緩皮膚老化的機制。 方法：首先采用酶消化法進(jìn)行體外人皮膚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)，然后將不同濃度的雌激素(0mol/L，1×10-5mol/L，1×10-4mol/L)加入體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞中，待藥物作用后，提取其中的總RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)獲得cDNA，并進(jìn)行體外擴增，對擴增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂凝膠電泳，并根據(jù)條帶的亮度來判斷成纖維細(xì)胞中

2、MMP-1mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果：經(jīng)酶消化法體外培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞，增生活躍，形態(tài)良好，呈典型的梭形、柳葉形，用細(xì)胞計數(shù)法進(jìn)行生長曲線，顯示：潛伏期為0～2天，指數(shù)生長期為2～5天，之后進(jìn)入平臺期。對細(xì)胞進(jìn)行雌二醇干預(yù)，經(jīng)β-actin內(nèi)參校正后，RT-PCR示低劑量組與對照組相比，MMP-1mRNA表達(dá)水平的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，高劑量組雌激素與對照組相比，MMP-1mRNA表達(dá)水平有所下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05