苦參總堿、葉綠酸銅鈉和三苯氧胺對HT29細胞環(huán)氧化酶功能的影響.pdf

1、浙江大學碩士學位論文苦參總堿、葉綠酸銅鈉和三苯氧胺對HT29細胞環(huán)氧化酶功能的影響姓名：楊毅申請學位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學指導教師：張?zhí)K展20040501浙江大學碩士學位論文臨床研究也已開展。傳統(tǒng)的COX抑制劑如NSAIDs，由于在抑制COX2的同時也抑制了COXl的生理功能，長期使用時往往有較大的副作用，因此特異性干預COX2一般可取得較好的效果而不產(chǎn)生大的副作用，篩選選擇性COX2抑制劑對于腫瘤的臨床防治有著重大意義。中藥制劑苦參總

2、堿(Matrine，MAT)，葉綠酸銅鈉(SodiumCopperChlorophyllin，CHL)和內(nèi)分泌治療藥物三苯氧胺(Tamoxifen，TAM)，為三種均己在l臨床中應用，而且被認為是在長期使用時副作用相對較小的藥物。因此，本次研究中，我們選擇這三種藥物作為我們選擇性COX2抑制劑初步篩選的目標。MAT和CHL為兩種目前已用于腫瘤輔助治療的中藥制劑。已有研究證實，MAT存在一定的抑瘤作用，可顯著抑制白血病細胞K562等腫瘤細

3、胞的增殖并誘導其分化；CHL也被認為存在抗突變、抗腫瘤作用。TAM廣泛用于乳腺癌治療，Brodie等發(fā)現(xiàn)，雌激素依賴乳腺癌患者腫瘤中存在芳香化酶和COX2的高表達。COX2的產(chǎn)物前列腺索E2(Prosta91andingE2，PGE2)對腫瘤及其周圍組織中的雌激素合成有著強烈的刺激作用，應用COX2抑制劑可減少雌激素的產(chǎn)生?？梢?，MAT和TAM均已在臨床上用于抗腫瘤治療，而CHL也已在I|缶床中應用且有實驗室證據(jù)證明其具有抗腫瘤作用，但

4、這三種藥物與COX2相關(guān)性的研究，目前均無報道，故本實驗通過研究低濃度下這三種藥物對COX功能的影響，以期為篩選新的選擇性COX2抑制劑提供初步的依據(jù)，同時也為這三種常見藥物的臨床應用開辟新的領(lǐng)域。研究方法：本實驗所用HT29細胞為一人大腸癌細胞系，其COX2為高表達。由浙江大學醫(yī)學院腫瘤研究所提供。按要求培養(yǎng)細胞，實驗時取對數(shù)生長期的HT29細胞，制備成單細胞懸液(210i／m1)，接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔2x101，置于培養(yǎng)箱中培

5、養(yǎng)，待貼壁完全后進行藥物處理實驗。按不同濃度梯度加入藥物，每一濃度平行6孔，并設(shè)空白對照組6孔(不加藥品)，TAM板另設(shè)溶劑對照孔，取DMSO體積分數(shù)為4％、2％各3孔。置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12小時后，以MTT法測定各藥物的IC50。按試劑盒說明書要求配置及貯存ELISA測定所需各試劑。依據(jù)MTT法測定的藥物IC50選擇濃度，基本按1／2、1／4、1／8IC50的梯度為藥物作用濃度分別加入藥物，每一濃度取平行孔6孔。另設(shè)空白對照組6孔，其中不