辛伐他汀對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HT29的促凋亡作用及可能機(jī)制.pdf

1、目的：為進(jìn)一步研究他汀類藥物抗腫瘤作用，探討他汀類藥物內(nèi)在的抗腫瘤機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)觀察辛伐他汀對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HT29增殖、凋亡的影響，以及辛伐他汀對(duì)凋亡相關(guān)Bcl-2、Bax分別在基因水平和蛋白表達(dá)水平的調(diào)控，闡述辛伐他汀促進(jìn)人結(jié)腸癌細(xì)胞HT29凋亡的可能機(jī)制，為他汀類藥物在結(jié)腸癌的預(yù)防、治療方面應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：常規(guī)培養(yǎng)人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞，取其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。用不同濃度(終濃度為0、40、60、8

2、0、100μmol/L)辛伐他汀分別培養(yǎng)人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞24、48、72h，觀察細(xì)胞的增殖情況，噻唑藍(lán)比色法(MTT)檢測(cè)辛伐他汀作用下的細(xì)胞吸光度(OD)值，并計(jì)算其生長(zhǎng)抑制率值；流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度辛伐他汀(終濃度為0、40、60、80、100μmol/L)對(duì)HT29細(xì)胞作用48h后細(xì)胞凋亡率；RF-PCR法觀察不同濃度辛伐他汀(終濃度為0、40、60、80μmol/L)作用48h后HT29細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax

3、mRN人水平；Westernblotting法觀察不同濃度辛伐他汀(終濃度為0、40、60、80μmol/L)作用48h后HT29細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)情況。本實(shí)驗(yàn)以正常培養(yǎng)的HT29細(xì)胞(辛伐他汀終濃度為0μmol/L)為陰性對(duì)照，不同濃度辛伐他汀干預(yù)后的HT29細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組。
　　結(jié)果：噻唑藍(lán)比色法(MTT)示辛伐他汀處理后的HT29細(xì)胞吸光度(OD)值較對(duì)照組降低(P<0.05)，根據(jù)OD值計(jì)算所得抑制率

4、隨著作用濃度的增加、作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增高；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)辛伐他汀對(duì)HT29細(xì)胞具有促凋亡作用，隨著辛伐他汀藥物濃度增大其凋亡率逐漸增高(P<0.05)；RT-PCR試驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)辛伐他汀作用HT29細(xì)胞后，隨著辛伐他汀作用濃度的增高，Bcl-2 mRNA條帶密度較陰性對(duì)照組依次降低、Bax mRNA條帶密度較陰性對(duì)照組依次增高，各實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組相比差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并呈現(xiàn)出濃度依賴性(P<0.05)。Western blotti

5、ng實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)辛伐他汀作用于HT29細(xì)胞后，隨著辛伐他汀作用濃度的增高，Bcl-2的蛋白表達(dá)依次降低、而Bax的蛋白表達(dá)依次增高，各實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組相比其差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并呈現(xiàn)濃度依賴性(P<0.05)。
　　結(jié)論：辛伐他汀可抑制體外培養(yǎng)的結(jié)腸癌細(xì)胞HT29的增殖，促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞HT29的捌亡。辛伐他汀干預(yù)結(jié)腸癌HT29細(xì)胞后Bcl-2 mRNA和蛋白表達(dá)降低；Bax mRNA和蛋白表達(dá)增高。在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平下調(diào)Bcl-2的表