TLR4和TLR2激動劑協(xié)同誘導SR-A受體表達及其在內毒素耐受中的作用.pdf

1、小劑量的內毒素預處理后的單核細胞和巨噬細胞對LPS再次刺激的反應性明顯降低，表現(xiàn)為炎癥因子的分泌減少；而且能提高小鼠在致死劑量內毒素再次刺激后的存活率，即內毒素耐受現(xiàn)象。自從證實TLR(Toll-likereceptor)4是LPS的信號受體以來，內毒素耐受的研究主要集中于信號受體和TLR4胞內信號分子的變化?；蚯贸囼炞C實SR-A(macrophagescavengerreceptorA)能通過調理素非依賴的方式吞噬細菌，從而提高小

2、鼠對病原體攻擊的抵抗能力，然而SR-A是否同樣參與內毒素目前還不清楚。我們發(fā)現(xiàn)LPS能以劑量和時間依賴的方式誘導RAW264.7表達SR-A，這與RAW264.7對LPS的再次刺激后分泌的炎癥因子(TNF-α和IL-6)減少之間有著很好的相關性。過量表達或瞬時轉染SR-A能抑制LPS刺激RAW264.7分泌炎癥因子或活化NF-κB，說明LPS誘導上調的SR-A參與了內毒素耐受。另外，LPS能增強RAW264.7對FITC-LPS的結合和

3、吞噬，但是能被清道夫受體SR配體Fucoidan和抗SR-A抗體2F8特異地抑制，提示RAW264.7結合和吞噬FITC-LPS的SR-A受體特異性。過量表達或瞬時轉染SR-A△1-49也同樣能抑制LPS刺激RAW264.7分泌炎癥因子或活化NF-κB，提示SR-A介導的RAW264.7對FITC-LPS的結合也能一定程度上抑制炎癥反應。雖然，TLR4是LPS的信號受體，但是TLR4/MD-2抗體抑制TLR4信號后并不能抑制LPS誘導R

4、AW264.7表達SR-A。然而，p38特異性抑制劑SB203580卻能完全抑制LPS誘導RAW264.7表達SR-A。因此，p38，而不是TLR4，依賴的SR-A上調可能通過結合或吞噬LPS參與RAW264.7細胞內毒素耐受的形成。 已知sLPS(來源于Sigma的EscherichiacoliO111：B4LPS)能誘導RAW264.7表達SR-A，但是許多商品化LPS，包括我們所用的sLPS，通常含有TLR4和TLR2兩種

5、激動劑，有關它們在誘導RAW264.7表達SR-A中的相對作用目前還不清楚。熒光素酶試驗證實我們所用的sLPS確實具有活化TLR4和TLR2兩種活性，但是重新純化去除TLR2激動劑或用多粘霉素(PmB)特異中和TLR4激動劑后的sLPS均只能微弱地誘導RAW264.7表達SR-A，但是等量的uLPS(re-extractedsLPS)和Pam3CSK4混合物卻能協(xié)同地誘導RAW264.7表達SR-A，而對TLR2和TLR4受體的表達沒有

6、協(xié)同作用。雖然，TLR2和TLR4激動劑能協(xié)同刺激RAW264.7分泌炎癥因子，但是細胞因子TNF-α、IL-6、IL-10或IL-12單獨與RAW264.7孵育均不能誘導SR-A的表達，TNF-α甚至能抑制uLPS和Pam3CSK4混合物誘導SR-A的表達。15μMNF-κB抑制劑PDTC只能微弱抑制uLPS和Pam3CSK4混合物誘導SR-A的表達，但是uLPS和Pam3CSK4混合物能促進p38的磷酸化，而且10μM以上濃度的p3

7、8特異性抑制劑SB203580能完全抑制LPS誘導RAW264.7表達SR-A。另外，uLPS和Pam3CSK4混合物還能促進RAW264.7結合和吞噬FITC-LPS，但是能被抗SR-A抗體2F8特異地抑制，提示RAW264.7結合和吞噬FITC-LPS的SR-A受體特異性。因此，我們的結果證明了TLR4激動劑和TLR2激動劑通過促進p38的磷酸化協(xié)同誘導RAW264.7表達SR-A，促進RAW264.7結合和吞噬LPS，從而負調炎癥