內(nèi)毒素耐受小鼠早期肺部炎癥反應(yīng)及TLR4、TLR2表達(dá)動態(tài)變化研究.pdf

1、【目的】內(nèi)毒素(LPS)具有極強(qiáng)的生物活性,是革蘭陰性細(xì)菌外膜的主要成分.革蘭陰性桿菌敗血癥等嚴(yán)重內(nèi)毒素血癥極易并發(fā)急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)甚至多器官功能衰竭,死亡率高,是臨床常見和亟待解決的問題.目前尚無針對內(nèi)毒素的特效治療.內(nèi)毒素作用于中性粒細(xì)胞與單核巨噬細(xì)胞,誘導(dǎo)一系列抗炎和促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生,在內(nèi)毒素血癥致肺部炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用.Toll樣受體4(TLR4)是內(nèi)毒素介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要受體,TLR2也可能參與LP

2、S信號轉(zhuǎn)導(dǎo).內(nèi)毒素耐受是預(yù)先注射小劑量或亞致死量LPS后,機(jī)體對大劑量或致死量LPS呈低反應(yīng)甚至無反應(yīng)的現(xiàn)象.已有的研究表明內(nèi)毒素耐受時(shí),內(nèi)毒素血癥引起的全身反應(yīng)減輕,血液中促炎癥細(xì)胞因子低表達(dá).近年來有實(shí)驗(yàn)表明以小劑量LPS預(yù)刺激小鼠巨噬細(xì)胞,在LPS再次刺激后,細(xì)胞表面TLR4表達(dá)下降.該實(shí)驗(yàn)通過建立內(nèi)毒素血癥肺部炎癥反應(yīng)和內(nèi)毒素耐受小鼠模型,動態(tài)觀察內(nèi)毒素耐受小鼠在內(nèi)毒素血癥時(shí)早期炎癥反應(yīng)與正常小鼠的異同.同時(shí)動態(tài)觀察肺勻漿中腫瘤

3、壞死因子-α(TNF-α)和干擾素-γ(IFN-γ)的分泌,并觀察肺部TLR4 mRNA與TLR2 mRNA的表達(dá)情況,初步探索體內(nèi)內(nèi)毒素耐受可能的機(jī)制.【方法】(1)內(nèi)毒素耐受和內(nèi)毒素血癥肺部炎癥反應(yīng)模型的建立:清潔級健康雄性BALB/c小鼠,體重20~25克,隨機(jī)分入內(nèi)毒素耐受(ET)組和正常對照(NC)組.ET組1mg/kg/d腹腔注射LPS,連續(xù)4天建立內(nèi)毒素耐受小鼠模型;NC組注射等量生理鹽水.第五天腹腔注射10 mg/kg

4、LPS誘導(dǎo)全身以及肺部炎癥反應(yīng).各組按注射大劑量LPS前(0小時(shí)),注射后2、6小時(shí)分為3組,n=5,在各時(shí)間點(diǎn)收集肺組織分別迅速置入4﹪甲醛和液氮,保存于-80℃待測.(2)另取24只小鼠,隨機(jī)分入2組,觀察至腹腔注射10mg/kg LPS后5天,在耐受誘導(dǎo)期間每日同一時(shí)間給藥前記錄體重,觀察飲食、活動等情況.至大劑量內(nèi)毒素腹腔注射后觀察小鼠生存情況.(3)由冰凍肺組織制備肺組織勻漿,采用ELISA方法測定肺勻漿中TNF-α與IFN-