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文檔簡介
1、目的:研究rh-EPO對人MDA-MB-231乳腺癌細胞在裸鼠體內外生長的影響并探討其在調控腫瘤生長、血管生成和細胞凋亡中作用及機制。
方法:
1、選用適當濃度的p38MAPK抑制劑SB203580、ERK抑制劑U0126、JNK抑制劑SP600125、NF-κB抑制劑PDTC預處理乳腺癌MDA-MB-231細胞,用MTT法檢測經不同濃度的rh-EPO誘導后細胞的增殖情況。
2、MDA-MB-231細胞經不
2、同濃度rh-EPO處理后,用ELISA法檢測炎性介質TNF-α、PGE-2的水平變化。
3、將MDA-MB-231細胞接種于裸鼠皮下建立荷瘤模型。2周后,將裸鼠隨機分成4組,每組6只,分別為rh-EPO組、陰性對照組、EPO拮抗劑組、EPO+EPO拮抗劑組。每3天給藥1次,共5次。斷頸處死裸鼠,測量腫瘤的體積、重量。RT-PCR、Western-blot檢測瘤體內EPO/EPO-R表達、TNF-α、IL-10、COX-2、BC
3、L-2;免疫組化檢測腫瘤內微血管密度和VEGF的表達;TUNEL法檢測細胞的凋亡情況。
結果:
1、rh-EPO有促進MDA-MB-231細胞增殖的作用,經NF-κB的抑制劑PDTC、p38MAPK抑制劑SB203580處理后,其促進細胞增殖的作用減退。經JNK抑制劑SP600125、ERK抑制劑U0126作用后rh-EPO促進細胞生長的作用幾乎不受影響。
2、ELISA結果表明rh-EPO能促進乳腺癌細胞
4、MDA-MB-231中的PGE-2、TNF-α的表達,并呈時間、劑量依賴性。
3、rh-EPO組與其它3組相比,腫瘤的生長迅速,瘤體的體積更大,重量更重(P<0.05)。
4.半定量RT-PCR及Westernblot結果表明,與陰性對照組相比,rh-EPO組EPO的表達量明顯增加(P<0.01)。與陰性對照組相比較,rh-EPO組、EPO拮抗劑組和EPO+EPO拮抗劑組的EPOR、TNF-α、IL-10表達量明顯較
5、高(P<0.05)。
5.免疫組化結果顯示,與其它3組相比,rh-EPO組的MVD值和VEGF的表達量均顯著升高(P<0.05)。
6、TUNEL結果顯示,rh-EPO組與其它3組相比凋亡指數(shù)明顯降低(P<0.05)。
結論:
1.rh-EPO可能是通過NF-κB、MAPK傳導通路發(fā)揮效應,促進乳腺癌細胞株MDA-MB-231的增殖,促進腫瘤微血管的形成和抑制腫瘤細胞的凋亡。
2.rh-
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