前列腺素E1對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中NO和eNOS的影響.pdf

1、[目的]血管內(nèi)皮功能與許多心血管疾病發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，如高血壓冠心病、心力衰竭、外周血管疾病等。一氧化氮(nitricoxide，NO)是血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的重要因子，主要通過(guò)一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase，eNOS)的活化從L-精氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái)。NO介導(dǎo)內(nèi)皮依賴的血管舒張，在內(nèi)皮功能異常中起了重要作用。NO生成減少或者活性降低是動(dòng)脈粥樣硬化的始動(dòng)因子。炎癥因子如白介素-1β(interleukin

2、-1β，IL-1β)，腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有多種作用，可以導(dǎo)致血栓前狀態(tài)和炎癥前狀態(tài)；它們抑制內(nèi)皮型一氧化氮合酶，激活誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)，影響NO的合成和釋放，損傷內(nèi)皮功能。前列腺素E1(prostaglandinE1，PGE1)是血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的一種保護(hù)因子，通過(guò)不同途徑在心血管系統(tǒng)中起作用。已有的研

3、究表明，PGE1主要可舒張血管，改善末梢循環(huán)；抑制血小板聚集，防止血栓形成；保護(hù)缺血性心肌，縮小梗塞面積，已廣泛應(yīng)用于冠心病心絞痛、心力衰竭、高脂血癥、糖尿病神經(jīng)病變、慢性腎功能不全等。但是其機(jī)理尤其是炎癥狀態(tài)下對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的作用尚未完全明確。因此，我們將通過(guò)探討PGE1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞NO表達(dá)和eNOS活性的影響，以及PGE1對(duì)TNF-α干預(yù)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)

4、中NO和eNOS表達(dá)的影響，來(lái)探討PGE1在治療心血管疾病中的可能作用機(jī)制。 [方法]1、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)培養(yǎng)：取健康產(chǎn)婦剖宮產(chǎn)臍帶，用0.1％Ⅰ型膠原酶消化獲得HUVECs，接種于M199培養(yǎng)基(含15％胎牛血清，10ng/mlEGF)，后每2～3天換一次液，直至細(xì)胞80％融合，用2％血清培養(yǎng)基孵育24h后用于實(shí)驗(yàn)。用Ⅷ因子抗體鑒定呈陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞的胞漿內(nèi)有棕色顆粒。 2、分別用0，0.04ug/ml,

5、0.1ug/ml,0.2ug/ml，0.3ug/ml，0.4ug/ml的PGE1濃度作用于內(nèi)皮細(xì)胞24h；用0.4ug/ml的PGE1作用于內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)3h，6h，12h，24h，48h，且每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均以不加藥的空白組作對(duì)照。收集的細(xì)胞進(jìn)行超聲破碎，用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定總蛋白濃度。用NO試劑盒檢測(cè)HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)上清液和細(xì)胞中NO水平的變化，用NOS試劑盒檢測(cè)細(xì)胞eNOS活性的改變。 [結(jié)果]1.隨著PGE1濃度的升高

6、，HUVECs中的eNOS的活性和NO的含量均顯著增加(P＜0.05)；2.短時(shí)間PGE1的干預(yù)對(duì)HUVECseNOS和NO的影響均不明顯，24h后HUVECs中eNOS活性開(kāi)始明顯升高(P＜0.05)，而NO的含量自12h起隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加(P＜0.05)；3.用不同濃度PGE1預(yù)處理后，TNF-α對(duì)HUVECseNOS活性的抑制作用減弱。 [結(jié)論]1.PGE1可能通過(guò)誘導(dǎo)HUVECseNOS的表達(dá)，促進(jìn)HUVECsNO的釋放