前列腺素E1對人臍靜脈內(nèi)皮細胞中NO和eNOS的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[目的]血管內(nèi)皮功能與許多心血管疾病發(fā)生、發(fā)展有關,如高血壓冠心病、心力衰竭、外周血管疾病等。一氧化氮(nitricoxide,NO)是血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的重要因子,主要通過一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase,eNOS)的活化從L-精氨酸轉化而來。NO介導內(nèi)皮依賴的血管舒張,在內(nèi)皮功能異常中起了重要作用。NO生成減少或者活性降低是動脈粥樣硬化的始動因子。炎癥因子如白介素-1β(interleukin

2、-1β,IL-1β),腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)對內(nèi)皮細胞有多種作用,可以導致血栓前狀態(tài)和炎癥前狀態(tài);它們抑制內(nèi)皮型一氧化氮合酶,激活誘導型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS),影響NO的合成和釋放,損傷內(nèi)皮功能。前列腺素E1(prostaglandinE1,PGE1)是血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的一種保護因子,通過不同途徑在心血管系統(tǒng)中起作用。已有的研

3、究表明,PGE1主要可舒張血管,改善末梢循環(huán);抑制血小板聚集,防止血栓形成;保護缺血性心肌,縮小梗塞面積,已廣泛應用于冠心病心絞痛、心力衰竭、高脂血癥、糖尿病神經(jīng)病變、慢性腎功能不全等。但是其機理尤其是炎癥狀態(tài)下對內(nèi)皮細胞的作用尚未完全明確。因此,我們將通過探討PGE1對內(nèi)皮細胞NO表達和eNOS活性的影響,以及PGE1對TNF-α干預的臍靜脈內(nèi)皮細胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)

4、中NO和eNOS表達的影響,來探討PGE1在治療心血管疾病中的可能作用機制。 [方法]1、人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)培養(yǎng):取健康產(chǎn)婦剖宮產(chǎn)臍帶,用0.1%Ⅰ型膠原酶消化獲得HUVECs,接種于M199培養(yǎng)基(含15%胎牛血清,10ng/mlEGF),后每2~3天換一次液,直至細胞80%融合,用2%血清培養(yǎng)基孵育24h后用于實驗。用Ⅷ因子抗體鑒定呈陽性,陽性細胞的胞漿內(nèi)有棕色顆粒。 2、分別用0,0.04ug/ml,

5、0.1ug/ml,0.2ug/ml,0.3ug/ml,0.4ug/ml的PGE1濃度作用于內(nèi)皮細胞24h;用0.4ug/ml的PGE1作用于內(nèi)皮細胞(HUVEC)3h,6h,12h,24h,48h,且每個時間點均以不加藥的空白組作對照。收集的細胞進行超聲破碎,用考馬斯亮藍法測定總蛋白濃度。用NO試劑盒檢測HUVEC細胞培養(yǎng)上清液和細胞中NO水平的變化,用NOS試劑盒檢測細胞eNOS活性的改變。 [結果]1.隨著PGE1濃度的升高

6、,HUVECs中的eNOS的活性和NO的含量均顯著增加(P<0.05);2.短時間PGE1的干預對HUVECseNOS和NO的影響均不明顯,24h后HUVECs中eNOS活性開始明顯升高(P<0.05),而NO的含量自12h起隨時間延長而增加(P<0.05);3.用不同濃度PGE1預處理后,TNF-α對HUVECseNOS活性的抑制作用減弱。 [結論]1.PGE1可能通過誘導HUVECseNOS的表達,促進HUVECsNO的釋放

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