新型姜黃素類似物EF24體外抗腫瘤活性的氧化調節(jié)機制.pdf

1、中山大學博士學位論文新型姜黃素類似物EF24體外抗腫瘤活性的氧化調節(jié)機制姓名：譚欣申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：王深明20091125中山大學博上學位論文新型姜黃素類似物EF24體外抗腫瘤活性的氧化調節(jié)機制中文摘要1EF24對體外培養(yǎng)腫瘤細胞生長，凋亡和血管生成的影響姜黃素(1100pM)，EF24(0530gM)分別作用于乳腺癌細胞MCF7及卵巢癌細胞IGROVI，24及72d時后以MTS法(96孔板接種)或SRB法(24孔

2、板接種)檢測活細胞密度，繪出天然姜黃素及其合成物EF24對于各腫瘤細胞系的生長抑制曲線。應用原位末端轉移酶標記技術(TerminaldeoxynucleotidyltransferasedUTPnickendlabeling，TUNEL)觀察細胞凋亡的形態(tài)學改變；WesternBlot檢測細胞凋亡終末剪切酶caspase3的活化以及凋亡拮抗蛋白Bel2的表達變化。酶聯(lián)免疫吸附試驗(EnzymeLinkedlmmunoSorbentAss

3、ayELISA)檢測培養(yǎng)液上清VEGF分泌水平，實時定量PCR檢測細胞VEGF轉錄水平變化。2體外氧化應激與腫瘤細胞血管生成及細胞增殖的相互作用在體外培養(yǎng)的MCF7及IGROVl細胞系中，以過氧化氫模擬氧化應激，應用直接抗氧化劑N乙酰絲氨酸(NAeytylCysteine，NAC)，問接抗氧化劑叔丁基氫醌(tertbutylhydroquinone，tBHQ)以及姜黃素和EF24對細胞做預處理，檢測培養(yǎng)液上清中VEGF分泌的變化。熒光探

4、針標記腫瘤細胞，檢測姜黃素及EF24處理后細胞內活性氧自由基(ReactiveOxygenSpecies，ROS)的生成；以ROS清除劑超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)和過氧化氫酶(Catalase，CAT)預處理細胞，觀察EF24的細胞毒效應是否與ROS的水平相關。3EF24與抗氧化反應元件體外共轉染抗氧化反應元件(AntioxidantResponseElementARE)報告基因載體及內參J嘏pRL

5、TK質粒，應用姜黃素及EF24治療MCF7及IGROVl細胞，使用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)(DualLueiferaseReporterassayDLR)觀察化合物基于ARE的抗氧化反應機制。分離核漿蛋白，WesternBlot檢測藥物處理下核因子相關因子肭妮的核內轉位。4Elf24抗氧化作用機制與抗血管生成的聯(lián)系應用瞬時轉染小干擾RNA(smaUinterferingRNAsiRNh)技術敲除ARE激活通路中的關鍵細胞轉錄因子朋妮，