轉(zhuǎn)錄因子FoxO1在骨肉瘤發(fā)生中的作用研究.pdf

1、骨肉瘤是骨組織最常見(jiàn)的惡性腫瘤，同時(shí)是兒童與青少年第三常見(jiàn)的惡性腫瘤，血道遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移發(fā)生率高且發(fā)生早，因此其既往治療效果較差。骨肉瘤起源于間葉組織，其發(fā)生與成骨細(xì)胞在增殖及分化過(guò)程出現(xiàn)異常有關(guān)，導(dǎo)致細(xì)胞增殖異?；钴S、分化受抑制、凋亡不足。近年來(lái)，相繼有研究結(jié)果表明轉(zhuǎn)錄因子FoxO1與成骨細(xì)胞分化密切相關(guān)。
　　FoxO1屬于FoxO基因，而FoxO屬于Forkhead轉(zhuǎn)錄因子家族的亞族，其在進(jìn)化上高度保守，均含有一個(gè)Forkhead

2、保守區(qū)。通過(guò)調(diào)節(jié)不同的下游基因表達(dá)，F(xiàn)oxO1在細(xì)胞增殖、分化、凋亡及抗氧化等多個(gè)方面發(fā)揮著重要的作用。FoxO1與多種腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切，包括經(jīng)典霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、大腸癌、胰腺癌等。
　　據(jù)此推測(cè)FoxO1在骨肉瘤的惡性轉(zhuǎn)化中可能也具有重要作用，因此進(jìn)行了FoxO1在骨肉瘤發(fā)生過(guò)程中作用的研究。
　　目的：探討轉(zhuǎn)錄因子FoxO1在骨肉瘤發(fā)生，發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制。
　　方法：收集臨床骨肉瘤患者及股軟骨瘤患者標(biāo)本，

3、免疫組化對(duì)比兩者之間FoxO1表達(dá)差異。病毒感染骨肉瘤細(xì)胞系U2-OS、MG-63，通過(guò)zeocin篩選，獲得穩(wěn)定表達(dá)FoxO1的骨肉瘤細(xì)胞株，他莫西芬誘導(dǎo)FoxO1(A3)入核，臺(tái)盼藍(lán)染色觀察過(guò)表達(dá)FoxO1對(duì)細(xì)胞增殖的影響，細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞集落形成能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡，Q-PCR及Western blot檢測(cè)受FoxO1調(diào)控的下游基因。采用SiRNA在骨肉瘤細(xì)胞系HOS中下調(diào)FoxO1，檢測(cè)對(duì)其細(xì)胞克隆形成能力

4、的影響。應(yīng)用FoxO1特異的小分子抑制劑AS1842856處理骨肉瘤細(xì)胞株HOS及MNNG/HOS細(xì)胞，觀察其對(duì)細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示骨肉瘤標(biāo)本中FoxO1表達(dá)明顯低于骨軟骨瘤及正常骨組織。過(guò)表達(dá)FoxO1后，細(xì)胞增殖受抑，集落形成能力減低，細(xì)胞凋亡增加，周期阻滯在G1/S轉(zhuǎn)化期。Q-PCR顯示，凋亡促進(jìn)基因Bim、Noxa、TRAIL表達(dá)均上調(diào)，細(xì)胞周期依賴(lài)性激酶抑制基因CDKN1B表達(dá)亦上調(diào)，細(xì)胞周期蛋白