蘿卜游離小孢子培養(yǎng)與核型分析.pdf

1、生物技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，為蘿卜育種提供了新的思路和手段，游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用大大加快了蘿卜的育種進(jìn)程。本研究利用13份蘿卜材料，進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)胚狀體誘導(dǎo)與再生植株形成體系的優(yōu)化，同時(shí)對(duì)再生植株的繼代快繁、倍性鑒定進(jìn)行相關(guān)的探討。并對(duì)部分供體植株的染色體數(shù)目和核型進(jìn)行系統(tǒng)的分析，為蘿卜的遺傳育種提供初步的細(xì)胞學(xué)依據(jù)。結(jié)果如下： 1.研究發(fā)現(xiàn)基因型嚴(yán)重影響出胚率，13個(gè)供試材料有9個(gè)誘導(dǎo)出胚狀體，其它4個(gè)沒(méi)有誘導(dǎo)出任何形狀

2、的胚狀體。胚狀體誘導(dǎo)率差異很大，從最高每蕾可得到17.03個(gè)到最低每蕾只得到0.12個(gè)，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)雜交種的出胚率明顯高于自交系的。 2.32.5℃熱激48h對(duì)于小孢子啟動(dòng)分裂非常必要，未經(jīng)32.5℃熱激處理的小孢子，在所有基因型中均未誘導(dǎo)出胚狀體。 3.利用瓣藥比(花瓣長(zhǎng)度/花藥長(zhǎng)度)可以準(zhǔn)確的判斷小孢子的發(fā)育時(shí)期，瓣藥比等長(zhǎng)或花瓣微短于花藥的花蕾(花瓣長(zhǎng)度/花藥長(zhǎng)度：0.75-1)被認(rèn)為是最適宜選取進(jìn)行小孢子培養(yǎng)的，此

3、時(shí)的小孢子幾乎都處于單核靠邊期。 4.不同的培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果也有差異，NLN-13最有利于蘿卜游離小孢子培養(yǎng)，培養(yǎng)基中大量元素的減半與否不是影響蘿卜出胚率的主要因素。 5.NLN-13中添加0.75g/L的活性炭有助于提高胚狀體的產(chǎn)量和質(zhì)量。 6.低溫處理(4℃)只是暫時(shí)保存材料使之不降低培養(yǎng)效果的一種有效的方法，并不能顯著提高誘導(dǎo)率。 7.隨著6-BA含量增加，誘導(dǎo)率先增高，再下降，小孢子胚誘導(dǎo)率最高的

4、6-BA濃度是0.10mg/L，濃度高于10mg/L，隨濃度加大，胚產(chǎn)量呈下降趨勢(shì)。 8.將子葉胚轉(zhuǎn)綠后繼代在Bs(蔗糖3％+瓊脂0.8％+6-BA0.2mg/L+NAA0.02 mg/L+活性炭0.1％)上，胚狀體成活率明顯高于繼代在MS上的。實(shí)驗(yàn)認(rèn)為生根培養(yǎng)基：Bs+蔗糖3％+瓊脂0.8％+NAA0.2mg/L最適宜蘿卜再生植株生根，生長(zhǎng)的根系粗壯整齊。在溫度(25℃)、濕度(85％)和光照條件(4000Lx)適宜的情況下，

5、小孢子植株的移栽成活率可以達(dá)到85％-95％。 9.再生植株的鑒定：應(yīng)用形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)和流式細(xì)胞儀可以快速鑒定花粉植株。染色體鑒定結(jié)果：?jiǎn)伪扼w植株n=x=9，正常二倍體2n=2x=18，四倍體4n=4x=36；流式細(xì)胞儀鑒定結(jié)果：?jiǎn)伪扼w材料DNA相對(duì)含量=100，二倍體材料DNA相對(duì)含量=200，四倍體材料DNA相對(duì)含量=400。綜合上述幾種鑒定方法，可以在短期內(nèi)對(duì)大量的再生植株進(jìn)行快速而準(zhǔn)確的鑒定。10.采用常規(guī)壓片法，對(duì)3種

6、不同皮色、2種不同地域蘿卜染色體數(shù)目和核型進(jìn)行分析。研究表明，它們的染色體數(shù)目均為2n=2x=18，核型公式可分別表示為NAU—SJMSH：18m，屬1A型，核不對(duì)稱系數(shù)52.27％；NAU-WYQ：2M+16m，屬1A型，核不對(duì)稱系數(shù)51.16％；NAU-YZBLB：18m，屬1A型，核不對(duì)稱系數(shù)52.47％；NAU.ZsDG：18m(2SAT)，屬1A型，核不對(duì)稱系數(shù)51.93％。根據(jù)核型分析的結(jié)果，初步討論了它們之間的親緣關(guān)系，綠