腸球菌毒力因子的檢測(cè)及溶血素cylLl和cylA基因的原核表達(dá).pdf

1、目的：檢測(cè)糞、屎腸球菌毒力基因分布的差別；構(gòu)建腸球菌溶血素cylL1，cylA重組子，體外表達(dá)cylU，cylA蛋白。為研究腸球菌毒力機(jī)制以及疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。 方法：根據(jù)Genebank上的腸球菌基因序列，合成cylA、cylU、gelE、efaA引物，PCR檢測(cè)四種基因在臨床分離菌株中的分布情況。PCR擴(kuò)增cylLl，cylA基因片段，連接到pET42a載體上，轉(zhuǎn)化到Topi0檢測(cè)陽(yáng)性克隆，鑒定測(cè)序，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21

2、(DE)菌株，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)腸球菌cylU，cylA，SDS—PAGE分析cylLl，cylA蛋白，WesternBlot進(jìn)行鑒定。 結(jié)果： 1．113株臨床分離腸球菌cylA，cylU，gelE，efaA基因檢出率分別是53．98％、52．21％、63．72％、64．60％。其中92株糞腸球菌cylA，cylLl，gelE，efaA基因檢出率分別是58．7％、57．6％、70．7％、73．9％；21株屎腸球菌cylA

3、，cylU，gelE，efaA基因檢出率分別是33．3％、28．6％、33．3％、23．8％。糞腸球菌、屎腸球菌各毒力基因檢出率經(jīng)卡方檢驗(yàn)，差別有顯著性。 2．構(gòu)建PET42a—cylLl，cylA重組子，體外表達(dá)cylU，cylA蛋白，通過(guò)SDS—PAGE分析、WesternBlot鑒定為cylU，cylA融合蛋白。 結(jié)論： 1．糞腸球菌毒力基因檢出率比屎腸球菌高。 2．在pET42a系統(tǒng)中成功表達(dá)了c