肺炎鏈球菌溶血素對細菌毒力的影響及誘導(dǎo)raw264.7細胞凋亡的研究

1、重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文肺炎鏈球菌溶血素對細菌毒力的影響及誘導(dǎo)RAW264.7細胞凋亡的研究姓名：李忱煒申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學(xué)指導(dǎo)教師：尹一兵201105重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ，L F H - P C R ) 方法構(gòu)建溶血素缺陷菌株，利用小鼠體內(nèi)實驗研究溶血素對細菌毒力的影響；利用純化的P L Y 蛋白處理R A W 2 6

2、4 ．7 細胞后，通過倒置顯微鏡的細胞形態(tài)觀察，M T T 增殖實驗，D N A L a d d e r 分析，流式細胞檢測等鑒定細胞凋亡；通過E L I S A 檢測C a s p a s e ．3 、8 、9 活性，通過免疫組織化學(xué)分析B a x 、F a s 、B c l ．2 蛋白的表達情況。結(jié)果成功構(gòu)建尸紗缺陷菌。該缺陷菌株入血時間( 6 h ) 明顯晚于野生菌株( 2 h ) ，且各時間點的菌量均顯著低于野生菌株，兩者比較有

3、統(tǒng)計學(xué)差異( P < O ．0 1 ) 5 缺陷菌株腹腔感染小鼠的中位生存時間為1 8天，野生菌株中位生存時間為3 天，兩者比較有統(tǒng)計學(xué)差異( P < 0 ．0 1 ) 。溶血素處理R A W 2 6 4 ．7 細胞后，倒置顯微鏡可見R A W 2 6 4 ．7 細胞典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變；M T T 增殖實驗顯示溶血素對R A W 2 6 4 ．7 細胞有明顯增殖抑制作用，而且呈現(xiàn)出時間和濃度依賴性；流式細胞儀分析結(jié)果顯示，

4、0 ．5u g ／m lP L Y 蛋白處理R A W 2 6 4 ．7 細胞2 4 h 和4 8 h 的早期凋亡率分別為7 ．4 2 ％和1 5 ．6 4 ％，l u g ／m lP L Y 蛋白處理R A W 2 6 4 ．7 細胞2 4 h 和4 8 h 的早期凋亡率分別為4 3 ．3 3 ％和5 5 ．4 3 ％( P < O ．0 5 ) ；瓊脂糖凝膠電泳染色體D N A 可見典型的凋亡“梯狀”條帶；溶血素處理R A W