PI-3K在哮喘大鼠T細(xì)胞中的表達(dá)及其與T細(xì)胞活化的聯(lián)系.pdf

1、目的 支氣管哮喘是一種由多種炎性細(xì)胞(T細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等)和炎性介質(zhì)參與的氣道慢性炎癥性疾患，這種氣道慢性炎癥導(dǎo)致氣道反應(yīng)性的增加，而后兩者是支氣管哮喘的基本特征。在氣道慢性炎癥的發(fā)生、發(fā)展與持續(xù)的過(guò)程中，T細(xì)胞又被認(rèn)為是關(guān)鍵性因素，因此，研究T細(xì)胞在支氣管哮喘發(fā)病過(guò)程中的作用己成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。 在T細(xì)胞的分化、活化、增殖、存活與抗凋亡等一系列細(xì)胞效應(yīng)過(guò)程中，多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與

2、其中，主要包括Ras/MAPK途徑、PLC-γ途徑、PI-3K/Akt途徑、PKC/NF-кB途徑、JAK/STAT途徑等等。這些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑彼此之間又存在這樣或那樣的聯(lián)系，從而共同影響了T細(xì)胞的一系列細(xì)胞效應(yīng)。不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在不同的T細(xì)胞亞型也有著不同的作用。 PI-3K是細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的一種關(guān)鍵酶，是T細(xì)胞最為重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一，與T細(xì)胞的增殖、分化、活化和抗病毒能力等密切相關(guān)，其功能主要表現(xiàn)為與CD28協(xié)同刺

3、激信號(hào)一道促進(jìn)T細(xì)胞活化;調(diào)節(jié)周期蛋白和促T細(xì)胞增殖因子等表達(dá)使T細(xì)胞周期正常進(jìn)行;通過(guò)調(diào)控凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)激酶活性和凋亡調(diào)控因子表達(dá)以拮抗P53、Fas等誘導(dǎo)的T細(xì)胞凋亡以及增強(qiáng)T細(xì)胞的抗病毒能力等等。已有報(bào)道證實(shí)PI-3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)Th2細(xì)胞亞型的活化、細(xì)胞因子的合成與分泌、細(xì)胞生存與抗凋亡具有重要作用。 鑒于Th2細(xì)胞和細(xì)胞因子在哮喘過(guò)程的重要作用，我們希望發(fā)現(xiàn)在這一過(guò)程中PI-3K是否也發(fā)揮一定的作用，特別是其與T細(xì)

4、胞的關(guān)系。因此，本次試驗(yàn)的目的就是首先探討PI-3K在哮喘T細(xì)胞中的表達(dá)改變以及這種變化與T細(xì)胞活化之間的可能存在的聯(lián)系，從而為研究PI-3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在哮喘T細(xì)胞的細(xì)胞效應(yīng)之中扮演的作用作出初步的判斷。 方法 按本實(shí)驗(yàn)室以往的經(jīng)驗(yàn)制備哮喘模型。24只雄性Wistar大鼠隨機(jī)均分為四組：正常對(duì)照組、哮喘激發(fā)一周組、哮喘激發(fā)二周組和哮喘激發(fā)四周組。體外培養(yǎng)大鼠T細(xì)胞，用免疫熒光細(xì)胞染色的方法檢測(cè)不同致喘時(shí)間大鼠的T細(xì)胞內(nèi)

5、的PI-3K的表達(dá)，同時(shí)用ELISA法對(duì)對(duì)應(yīng)的T細(xì)胞培養(yǎng)液中的IL-4的表達(dá)作出檢測(cè)，并以T細(xì)胞培養(yǎng)液中的IL-4的表達(dá)代表哮喘T細(xì)胞的活化，然后比較不同時(shí)間PI-3K的表達(dá)以了解PI-3K表達(dá)的改變，以及這種變化與IL-4的表達(dá)變化之間的聯(lián)系。 結(jié)果 以免疫熒光細(xì)胞染色的方法對(duì)哮喘及正常T細(xì)胞內(nèi)的PI-3K的表達(dá)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：PI-3K在正常T細(xì)胞內(nèi)有較弱的表達(dá)，而在哮喘T細(xì)胞內(nèi)這種表達(dá)明顯增強(qiáng)，差異有顯著性(p＜0.05

6、)，且在哮喘慢性期表現(xiàn)尤為明顯，各哮喘組與正常對(duì)照組比較差異有顯著性(P＜0.001)，哮喘二周組和哮喘四周組與哮喘一周組比較差異有顯著性(P＜0.05)，哮喘二周組和哮喘四周組之間差異沒(méi)有顯著性(P＞0.05)。同時(shí)，ELISA法進(jìn)行的T細(xì)胞培養(yǎng)上清中的IL-4表達(dá)測(cè)定顯示IL-4的表達(dá)也呈現(xiàn)明顯的上調(diào)，各組哮喘大鼠組培養(yǎng)上清中IL-4的表達(dá)水平均明顯高于正常組大鼠，存在差異的顯著性(p值均＜0.05)，而各哮喘組之間的培養(yǎng)上清內(nèi)IL