2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:研究PI3K/AKT信號(hào)通路在破骨細(xì)胞骨吸收上清(bone resorptionsupernatant,BRS)促成骨樣細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞分化-鈣化過(guò)程中的作用;以及AKT2節(jié)點(diǎn)蛋白與MC3T3-E1細(xì)胞分行鈣化過(guò)程的關(guān)系。方法:采用前期實(shí)驗(yàn)收集的破骨細(xì)胞骨吸收上清(BRS)處理小鼠MC3T3-E1細(xì)胞,并加入不同濃度的特異性阻斷劑LY294002(5μM,10μM,20μM),蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(western-boltti

2、ng)檢測(cè)相關(guān)信號(hào)蛋白AKT, p-AKT的表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)骨鈣素(osteocalcin,OCN)表達(dá)水平;茜素紅染色檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)鈣化水平。采用RNA干擾(RNA inference,RNAi)方法沉默MC3T3-E1細(xì)胞中AKT2基因,繼而檢測(cè)骨鈣素表達(dá)及鈣化水平改變。
   結(jié)果:破骨細(xì)胞骨吸收上清BRS作用后MC3T3-E1細(xì)胞P

3、I3K/AKT信號(hào)通路下游分子AKT及p-AKT表達(dá)顯著增加(P<0.05)。特異性抑制劑LY294002阻斷后,P-AKT出現(xiàn)了劑量依賴性降低(P<0.05),AKT蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯差異。該結(jié)果證實(shí)LY294002成功阻斷了PI3K/AKT信號(hào)通路。相應(yīng)的骨鈣素ELISA結(jié)果及茜素紅染色結(jié)果顯示LY294002阻斷該信號(hào)通路后,骨鈣素的表達(dá)和鈣化結(jié)節(jié)的形成面積均被抑制,且為劑量依賴性降低(P<0.05)。慢病毒干擾后,熒光顯微鏡觀察

4、及real-time PCR結(jié)果說(shuō)明,細(xì)胞內(nèi)AKT2基因被成功抑制;該基因被抑制后細(xì)胞骨鈣素的分泌及鈣化結(jié)節(jié)的產(chǎn)生受到了明顯的降低。
   結(jié)論:阻斷劑LY294002能有效的阻斷MC3T3-E1細(xì)胞的PI3K/AKT信號(hào)通路;PI3K/AKT信號(hào)通路在BRS促小鼠MC3T3-E1細(xì)胞分化-鈣化過(guò)程中發(fā)揮重要的作用;應(yīng)用pKLO.1-TRC-AKT2轉(zhuǎn)染小鼠MC3T3-E1細(xì)胞能顯著沉默AKT2表達(dá)。AKT2與MC3T3-E1細(xì)

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