RAGE信號途徑與老年性聾發(fā)病過程的關系研究.pdf

1、老年性聾病因其發(fā)病機制復雜，主要是衰老、凋亡、氧化應激和線粒體突變四大假說，其中衰老的自由基學說被較多人所接受。但產(chǎn)生自由基的原因甚多，分子機制尚未統(tǒng)一，因此目前臨床老年性聾的治療不容樂觀。RAGE與AGEs結合可引起細胞內(nèi)氧化應激和轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的激活，并可進一步增強RAGE表達[15]，從而引起持續(xù)的細胞損傷和功能紊亂。RAGE介導的氧化應激在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷性疾病中至關重要，而在衰老的內(nèi)耳中研究較少。本研究擬通過老年性聾動物模

2、型，探討RAGE及其介導信號途徑與老年性聾發(fā)生發(fā)展的關系。主要內(nèi)容分以下三部分進行。
　　第一部分：C57BL/6J小鼠年齡相關性聽功能和內(nèi)耳組織學的研究
　　目的：研究不同月齡的C57BL/6J小鼠的聽功能和內(nèi)耳組織學特點，探討老年性聾發(fā)病的動物模型。
　　方法：將C57BL/6J小鼠分為2月齡（幼年）、4月齡（中）、10月齡（老年）組，每組10只，分別行ABR閾值檢測聽力水平，組織學切片觀察耳蝸形態(tài)結構，基底膜鋪片

3、觀察耳蝸Corti器。
　　結果：（1）聽力學檢查示：C57BL/6J小鼠ABR反應閾值在2月齡組為10±1.24dBnHL；4月齡組時ABR反應閾值上升到18±1.87dBnHL，與2月齡組相比較，p<0.05，有統(tǒng)計學意義；10月齡組聽力損失60±2.91dBnHL，與4月齡組相比，p<0.01，差異有顯著的統(tǒng)計學意義；(2)HE染色見螺旋神經(jīng)節(jié)細胞隨年齡增大逐漸減少，到10月齡時明顯較2、4月齡減少，內(nèi)外毛細胞不同程度丟失，

4、血管紋在老年組的小鼠內(nèi)耳中變細窄；（3）基底膜鋪片示隨年齡增長內(nèi)外毛細胞由低回逐漸向頂回有所缺失，老年鼠外毛細胞缺失先于內(nèi)毛細胞。
　　結論：C57BL/6J小鼠隨年齡增大呈老年性聾的聽力變化。
　　第二部分：C57BL/6J小鼠血清AGEs、內(nèi)耳S100B和RAGE表達的相關性研究
　　目的：探討C57BL/6J小鼠內(nèi)耳RAGE表達和AGEs、S100B是否具有相關性。
　　方法：將C57BL/6J小鼠分為2月

5、齡、4月齡、10月齡組，每組10只，采用ELISA法檢測血清中AGEs含量，半定量RT-PCR檢測S100B在耳蝸中的表達，Real time PCR檢測RAGE在耳蝸中表達情況。
　　結果：（1）2月齡組小鼠血清AGEs濃度是71.33±7.09ng/L，4月齡組105.44±12.1ng/L，10月齡組226.67±7.63ng/L，經(jīng)兩兩比較，p<0.05，差異有統(tǒng)計學意義；（2）S100B在2月齡小鼠耳蝸中的灰度值是318

6、36±363,24.72,在10月齡小鼠耳蝸中的灰度值是67449.66±1988.61，P<0.05，差異有統(tǒng)計學意義。（3）Real time PCR檢測RAGEmRNA表達結果示：將2月齡組小鼠內(nèi)耳RAGE表達量為1定為標準對照組，4月齡組小鼠內(nèi)耳RAGE相對量1.61±0.07，10月齡組RAGE相對量3.13±0.08，兩兩比較p<0.05，P均有統(tǒng)計學意義。
　　結論：C57BL/6J小鼠隨年齡增大血清AGEs含量增多

7、，內(nèi)耳S100B表達增高，而促使它們的受體RAGE表達增多，說明內(nèi)耳RAGE表達和配體含量具有相關性。
　　第三部分：RAGE介導的信號通路在老年性聾的作用研究
　　目的：通過研究RAGE、NF-κB、P21在小鼠耳蝸中的表達，探討RAGE信號途徑與老年性聾發(fā)生的關系。
　　方法：將C57BL/6 J小鼠分為2月齡、4月齡、10月齡組，每組10只，免疫組化檢測RAGE、NF-κB、P21在耳蝸中的定位表達，采用圖像分析

8、軟件計算所染螺旋神經(jīng)節(jié)細胞和血管紋的平均光密度值。
　　結果：免疫組化結果見RAGE、NF-κB、P21主要在小鼠耳蝸的螺旋神經(jīng)節(jié)細胞、Corti器和血管紋中表達；在耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細胞和血管紋中10月齡組平均光密度值比4月齡組大，4月齡組平均光密度值比2月齡大，p<0.05，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論：RAGE、NF-κB、P21在老化型小鼠耳蝸中均有表達且隨年齡增大表達增多，說明RAGE、NF-κB、P21均參與老年性聾