XIAP-ShRNA對(duì)老年性聾小鼠聽覺皮層GABA能神經(jīng)元凋亡的作用.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文XIAPShRNA對(duì)老年性聾小鼠聽覺皮層GABA能神經(jīng)元凋亡的作用姓名：吳曉平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師：陳繼川201205第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文通過GeneBank查找小鼠XIAP全組基因序列，針對(duì)該基因設(shè)計(jì)3條干擾序列，構(gòu)建成干擾質(zhì)粒，測(cè)序鑒定后命名為XIAP—ShRNA—A、XIAP—ShRNA—B、XIAP—ShRNA—C，經(jīng)鑒定后在體外細(xì)胞水平檢驗(yàn)其功能及作用效果，即：原代培養(yǎng)孕14

2、～16天C57／BL6J小鼠大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞，純化并進(jìn)行B—tubulin熒光染色鑒定；同批次細(xì)胞導(dǎo)入XIAPShRNA干擾質(zhì)粒，經(jīng)RT—PCR、western—blot檢測(cè)神經(jīng)元內(nèi)XIAP表達(dá)水平；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)導(dǎo)入后神經(jīng)元凋亡情況，證明其功能效果并篩選最佳干擾序列質(zhì)粒。3活體內(nèi)檢測(cè)XIAPShRNA干擾質(zhì)粒對(duì)老年性聾聽皮層GABA能神經(jīng)元的作用。在立體定位儀及微量注射儀的幫助下將XIAP—ShRNA質(zhì)粒導(dǎo)入聽皮層，并于導(dǎo)入前、導(dǎo)入后

3、l4天和1月，檢測(cè)ABR，并利用TUNEL法，檢測(cè)年輕組及老年組C57BL／6J小鼠聽覺皮層GABA能神經(jīng)元凋亡，XIAP的表達(dá)水平，確定皮層神經(jīng)元凋亡程度及其與各自對(duì)照組差異。并通過檢查聽覺皮層中caspase一3的表達(dá)情況探討GABA神經(jīng)元凋亡的機(jī)制。結(jié)果：1年輕組小鼠ABR檢測(cè)lKHz、2KHz、4KHz、8KHz、l6KHz聽力閾值分別為2350315dBSPL、3275499dBSPL、405536dBSPL、6025573d

4、BSPL、6600619dBSPL，而老年組小鼠在1KHz、2KHz、4KHz、8KHz、16KHz的聽力閾值為6050669dBSPL、6225402dBSPL、6575455dBSPL、8150477dBSPL、8550444dBSPL。在各個(gè)頻率上老年組聽力閾值均比年輕組顯著增高(P00I)。2在年輕組小鼠聽皮層中GABA能神經(jīng)元凋亡陽性的數(shù)目較小，經(jīng)圖像分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)，TUNEL法結(jié)合間接免疫熒光法檢測(cè)聽皮層凋亡的GABA能神經(jīng)元

5、數(shù)目約為：1022084，而同樣的方法檢測(cè)老年性小鼠聽皮層中凋亡的GABA能神經(jīng)元數(shù)目約為1917406。老年組小鼠比年輕組小鼠聽皮層凋亡的GABA能神經(jīng)元明顯增多(P001)，而年輕組小鼠聽皮層的GABA能神經(jīng)元XIAP表達(dá)數(shù)目較多，經(jīng)分析計(jì)數(shù)，其數(shù)目為：4783677，老年組小鼠聽皮層的XIAP數(shù)目為：1327694，年輕組聽皮層表達(dá)XIAP的GABA能神經(jīng)元明顯多于老年組(P001)。3通過GeneBank查找小鼠XIAP全組基因