喹喔啉類藥物對哺乳動物細(xì)胞的遺傳毒性研究.pdf

1、本試驗(yàn)選用結(jié)構(gòu)類似的五種喹喔啉類藥物乙酰甲喹、卡巴氧、喹乙醇、喹烯酮和喹賽多，在體外試驗(yàn)條件下探討其對中國倉鼠肺成纖維細(xì)胞(V79)hgprt基因位點(diǎn)和人外周血淋巴細(xì)胞DNA的影響，為進(jìn)一步探討喹喔啉類藥物的遺傳毒性機(jī)理奠定基礎(chǔ)。 體外哺乳細(xì)胞致突變試驗(yàn)以五種喹喔啉類藥物為受試物，在加與不加S9代謝活化系統(tǒng)條件下觀察五種喹喔啉類藥物對V79細(xì)胞的致突變作用。每種受試藥物設(shè)四個(gè)劑量組、陰性對照組(DMEM，-S9與+S9)、溶劑對

2、照組(DMSO，-S9與+S9)和陽性對照組EMS(-S9)與B(a)P(+S9)。乙酰甲喹、卡巴氧、喹乙醇和喹烯酮給藥劑量相同，終濃度分別為10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL和1.25μg/mL，而喹賽多的終濃度分別為5μg/mL、2.5μg/mL、1.25μg/mL和0.625μg/mL，陰性對照(DMEM)與溶劑對照(DMSO)為總體積的0.5％，陽性對照終濃度EMS為1mg/mL，B(a)P為2μg/mL。經(jīng)不同的處

3、理4h后，采用克隆形成法觀察五種喹喔啉類藥物對V79細(xì)胞的慢性毒性作用，并在此基礎(chǔ)上觀察其對V79細(xì)胞hgprt基因位點(diǎn)突變頻率的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不加S9時(shí)，陽性對照EMS的突變率為溶劑對照組的67倍以上；加S9時(shí)，陽性對照B(a)P的突變率為溶劑對照組的32倍以上，兩者都為典型陽性反應(yīng)。不論加與不加S9代謝活化系統(tǒng)，乙酰甲喹、卡巴氧和喹乙醇都能引起V79細(xì)胞hgprt基因突變率顯著增加，并且突變率隨著濃度的增加而增大，呈現(xiàn)劑量反應(yīng)關(guān)系；

4、喹烯酮僅在10μg/mL，的劑量下與溶劑對照組差異顯著，而喹賽多在0.625～5μg/mL的劑量范圍內(nèi)，對V79細(xì)胞hgprt基因的突變率與溶劑對照組相比差異不顯著。試驗(yàn)結(jié)果表明，在本試驗(yàn)條件下，乙酰甲喹、卡巴氧和喹乙醇能引起V79細(xì)胞hgprt基因位點(diǎn)突變，而喹烯酮和喹賽多對V79細(xì)胞無誘變作用。在程序外DNA合成試驗(yàn)中，以五種喹喔啉類藥物為受試物，在加與不加S9代謝活化系統(tǒng)條件下觀察不同劑量喹喔啉類藥物對人外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷修

5、復(fù)的影響。每種受試藥物各設(shè)四個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)陰性對照組(RPMI1640，-S9與+S9)、溶劑對照組(DMSO，-S9與+S9)和陽性對照組HN<,2>'HCI(-S9)與B(a)P(+S9)。乙酰甲喹、卡巴氧、喹乙醇和喹烯酮的終濃度分別為20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL和2.5μg/mL，喹賽多終濃度分別為10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL和1.25μg/mL；陰性對照組(RPMI1640)和溶劑對照組(DM

6、SO)為總體積的1％，陽性對照組HN<,2>.HCI終濃度為20μg/mL，B(a)P終濃度為25μg/mL。經(jīng)不同濃度的藥物、羥基脲和<'3>H-TdR處理細(xì)胞4h后，收集細(xì)胞至玻璃纖維紙上，干燥后用液體閃爍儀測定DNA修復(fù)合成時(shí)<'3>H-TdR的摻入量(CPM)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，陽性對照HN<,2>HCl(-S9)和B(a)P(+S9)的CPM值與溶劑對照組差異極顯著，為典型的陽性反應(yīng)。不論加與不加S9代謝活化系統(tǒng)，在1.25～10μg

7、/mL，的濃度范圍內(nèi)，喹賽多不會引起人外周血淋巴細(xì)胞程序外DNA合成顯著增加，對細(xì)胞DNA無損傷作用。而喹烯酮、喹乙醇、卡巴氧和乙酰甲喹的CPM值與溶劑對照組相比差異顯著。喹烯酮10～20μg/mL的濃度，喹乙醇、卡巴氧和乙酰甲喹5～20μg/mL的濃度能引起人外周血淋巴細(xì)胞程序外DNA合成顯著增加，呈現(xiàn)劑量反應(yīng)關(guān)系，這表明喹烯酮、喹乙醇、卡巴氧和乙酰甲喹能引起人外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷。 以上結(jié)果顯示喹賽多對哺乳動物細(xì)胞無遺傳