黃灰青霉纖溶酶的分離純化及部分酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、纖溶酶是具有纖溶活性絲氨酸蛋白的一種，不但可直接溶解纖維蛋白，抑制血栓形成，而且具有抗血小板聚集，增強(qiáng)纖溶作用的功能。與目前臨床所用的尿激酶、鏈激酶等溶栓藥物相比，具有安全性好，易被人體吸收，作用直接迅速，藥效持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，成本低等優(yōu)點(diǎn)，具有開發(fā)成為新一代溶栓藥物或相關(guān)功能性食品的潛力。 論文利用本實(shí)驗(yàn)室首次報(bào)道的高產(chǎn)纖溶酶黃灰青霉菌株為發(fā)酵菌株，對(duì)其所產(chǎn)纖溶酶進(jìn)行分離純化以及部分酶學(xué)性質(zhì)的研究，研究結(jié)果如下： 1、通過硫

2、酸銨鹽析曲線，確定采用20％飽和度的硫酸銨鹽析除去部分雜蛋白，再用60％的飽和度鹽析得粗酶樣品。采用含10mmol/L NaCl，80mmol/L NaCl洗脫溶液，階段洗脫的方法進(jìn)行CM-Sepharose Fast Flow陽離子交換層析。10mmol/L磷酸洗脫液進(jìn)行Sephadex G-100凝膠過濾層析，進(jìn)一步純化蛋白。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳檢測(cè)為單一條帶，其分子量為15kDa，酶活回收率為10.5％，純化倍數(shù)為29.6。

3、 2、研究纖溶酶溶液的熱穩(wěn)定性和pH對(duì)酶活力的影響，結(jié)果表明：該酶最適作用溫度為41℃，纖溶酶在30℃～41℃范圍內(nèi)，隨溫度的升高，酶反應(yīng)速度加快，酶活力升高；當(dāng)溫度在41℃時(shí)，酶活力達(dá)到最高值；當(dāng)溫度大于41℃時(shí)，該酶隨溫度的升高，酶反應(yīng)速度減慢，酶活力迅速下降。該酶最適作用pH為8.8，環(huán)境pH7.8～9.8時(shí)酶活穩(wěn)定，在此范圍內(nèi)酶活力保存85％以上，說明該酶是一種偏堿性蛋白酶。當(dāng)pH小于7.8或pH大于9.8的條件下，該酶

4、活力迅速下降。 3、研究金屬離子對(duì)纖溶酶活力的影響，結(jié)果表明：K+和Mg2+離子對(duì)酶活力影響不大，F(xiàn)e2+和Mn2+離子對(duì)酶活力有明顯的抑制作用，Ca2+離子對(duì)酶活力有明顯的激活作用。 4、研究化學(xué)物質(zhì)對(duì)纖溶酶活力的影響，結(jié)果表明：化學(xué)物質(zhì)具有穩(wěn)定酶活力的作用。該作用由強(qiáng)至弱的順序?yàn)椋号Ｑ灏椎鞍?蔗糖>甘油>Tween-80>蛋白胨，其中以牛血清蛋白、蔗糖的效果最為顯著。 5、研究蛋白酶抑制劑對(duì)酶活力的影響，結(jié)