補(bǔ)腎化痰法對(duì)Alzheimer病模型大鼠Tau蛋白異常磷酸化調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的: 通過大鼠前腦基底核(BNM)注射Aβ<,25-35>+IBO建立AD大鼠動(dòng)物模型，探討補(bǔ)腎化痰法對(duì)AD模型大鼠Tau蛋白異常磷酸化的影響及其可能機(jī)制。 方法: 15月齡Wistar大鼠70只，隨機(jī)分為7組，即正常組、假手術(shù)組(簡稱空白組)、模型組、哈伯因治療組(簡稱西藥組)、補(bǔ)腎化痰法高、中、低劑量治療組(簡稱高、中、低量組)，每組10只。應(yīng)用腦立體定向技術(shù)給大鼠BNM注射凝聚態(tài)Aβ<,25-35>+IB

2、O構(gòu)建AD模型。注射2周后，高、中、低量組分別給大鼠該藥水煎液灌胃；西藥組用哈伯因混懸液灌胃；正常組、空白組、模型組均給予等容積的生理鹽水灌胃；28天后檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。采用Morris水迷宮進(jìn)行行為學(xué)評(píng)價(jià)，六胺銀染色方法觀察腦組織神經(jīng)纖維纏結(jié)，甲醇剛果紅染色法觀察老年斑，透射電鏡觀察海馬區(qū)超微病理改變，并用放射免疫法檢測(cè)大鼠海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū) Ach、AchE和 ChAT 活性變化，蛋白免疫印跡法檢測(cè)海馬勻漿中 Tau蛋白磷酸化總量、RT-P

3、CR法檢測(cè)腦組織cdk5活性、原位雜交法檢測(cè)海馬神經(jīng)元CaMKⅡ-α水平的變化、酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)大鼠腦組織 GSK-3β活性，并觀察補(bǔ)腎化痰法對(duì)上述指標(biāo)的影響，探討補(bǔ)腎化痰法作用的可能機(jī)制。 結(jié)果: 1.行為學(xué)結(jié)果顯示高、中、低量組和西藥組的平均潛伏期較模型組有明顯縮短(P<0.01)；高、中量組的象限百分比較模型組有明顯提高(P<0.01)，20％、40％區(qū)域較模型組有明顯減少(P<0.01)；模型組大鼠空間探索的象

4、限百分比和跨過原平臺(tái)位置次數(shù)比正常組和空白組明顯降低(P<0.01)。西藥組和高、中、低量組的象限百分比和跨過原平臺(tái)位置次數(shù)較模型組有明顯提高(P<0.01)，并呈現(xiàn)一定量效關(guān)系(P<0.01)。 2.電鏡、光鏡觀察結(jié)果顯示模型組大鼠海馬神經(jīng)元減少和變性；補(bǔ)腎化痰法能改善AD大鼠海馬病理改變。 3.模型組海馬皮質(zhì)區(qū)Ach和 ChAT 與各組相比均顯著減少(P<0.01)，AchE活性則明顯升高(P<0.01)；正常組與空

5、白組無明顯差異(p>0.05)；西藥組Ach與中、低量組比較有差異(P<0.01)，但與高量組比較無差異(p>0.05)。從ChAT 和AchE活性檢測(cè)結(jié)果看，兩者在各組比較趨勢(shì)一致，西藥組和高、中、低量組與模型組比較均有顯著差異(P<0.01)，低量組與西藥組比較有差異(P<0.05)，與中、高量組無差異(p>0.05)。中、高量組比較也無明顯差異(p>0.05)。 4.正常組與空白組海馬區(qū) Tau 蛋白磷酸化水平無明顯差異(

6、p>0.05)，模型組海馬區(qū) Tau 蛋白磷酸化水平顯著增加(P<0.01)，同時(shí)，模型組的cdk5 mRNA、CaMKⅡ-α、GSK-3β的表達(dá)較正常組均有顯著性的提高(P<0.01)。給藥后發(fā)現(xiàn)不但大鼠海馬組織Tau蛋白異常磷酸化水平下降，高、中量組與模型組比較顯著降低(P<0.01)，與西藥組也有差異(P<0.01)；而且GSK-3β、cdk5 mRNA、CaMKⅡ-α的表達(dá)亦明顯低于模型組，尤以高量組的作用最明顯，高、中、低量組

7、存在一定量效關(guān)系(P<0.01)。 結(jié)論: 1.Aβ<,25-35>+IBO注射大鼠BNM建立的 AD 大鼠模型，較好的模擬了AD行為學(xué)及病理形態(tài)改變等特征，可作為AD大鼠模型。 2.補(bǔ)腎化痰法可顯著改善AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙。 3.補(bǔ)腎化痰法可以提高海馬組織中Ach和增加ChAT的活性，降低AchE的活性，使膽堿能神經(jīng)元的作用增強(qiáng)。 4.補(bǔ)腎化痰法對(duì)AD模型大鼠海馬組織病理形態(tài)改變具有改善作