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文檔簡介
1、目的:通過對人腎癌細胞的無血清培養(yǎng)獲取腎癌干細胞,找出人腎癌干細胞的成熟的培養(yǎng)方法；進一步檢測腎癌細胞、腎癌干細胞中端粒酶的活性,從而探討端粒酶活性在腎癌發(fā)生、發(fā)展及治療方面的重要意義。
方法:利用含有表皮生長因子(Epidermal Growth Factor,EGF)、堿性成纖維生長因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)的DMEM/F12培養(yǎng)基無血清懸浮培養(yǎng)分離腎癌干細胞,并觀察
2、其生長
特性；通過流式細胞儀檢測其CD133、CD34的表達情況及其凋亡率,以正常腎組織細胞及腎癌細胞作為對照,采用端粒重復序列擴增的方法(Telomeric Repeat Amplification Protocol,TRAP)實時定量檢測腎癌干細胞端粒酶的活性。
結(jié)果:腎癌干細胞接種于DMEM/F12無血清培養(yǎng)基后,細胞呈圓形懸浮于培養(yǎng)液中；2天后有細胞球生成,每個細胞球含3-8個細胞,折光性較強；7天后
3、細胞球明顯增多,體積增大,為規(guī)則的圓形或卵圓形。無血清培養(yǎng)的腎癌干細胞球CD133+CD34。率明顯高于含血清培養(yǎng)的腎癌細胞CD133+CD34率,凋亡率較血清培養(yǎng)的。腎癌細胞低；正常腎組織細胞未檢測出有CD133及CD34的表達,三者間比較有顯著意義(F=328.25,P<0.05)。腎癌干細胞球和腎癌細胞端粒酶活性均高于正常腎組織細胞(F=278.74,P<0.05),而前二者之間端粒酶活性無明顯差異。
結(jié)論:與含血清
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