脫氧核酶對人肝癌SMMC-7721細胞端粒酶活性的影響.pdf

1、廣東藥學院碩士學位論文脫氧核酶對人肝癌SMMC7721細胞端粒酶活性的影響姓名：洪潔華申請學位級別：碩士專業(yè)：病原生物學指導教師：呂小迅劉曉波20080501廣東藥學院碩士研究生學位論文IIRTPCR擴增hTERT基因片段，MTT比色分析法測定細胞增殖抑制情況；用TRAPPCR銀染法檢測端粒酶活性；統(tǒng)計學處理采用多樣本均數兩兩比較的方差分析。結果:1.胞外切割后RTPCR擴增產物1%瓊脂糖凝膠電泳分析顯示:各組泳道中內對照βactin擴

2、增產物條帶(592bp)的亮度相似，而hTERT擴增產物條帶(222bp)的亮度DzTi組明顯弱于其它兩組?；叶葤呙璋攵拷Y果顯示，空白組、DzTi組和DzTiscr對照組SMMC7721細胞中hTERTmRNA的相對表達量分別為0.7180.014、0.2830.012、0.7160.019，q檢驗方差分析，DzTi組hTERTmRNA相對表達量分別與空白組及陰性對照組相比，均下降61%左右，差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.轉染4

3、8h后各組RTPCR擴增產物凝膠電泳分析顯示:各組泳道中內對照βactin擴增產物條帶(592bp)的亮度相似，而hTERT擴增產物條帶(222bp)的亮度DzTi組明顯弱于其它三組?；叶葤呙璋攵拷Y果顯示，空白組、脂質體組、DzTi組和DzTiscr對照組SMMC7721細胞中hTERTmRNA的相對表達量分別為0.7260.018、0.7250.011、0.1700.029、0.7100.013，經q檢驗方差分析，DzTi組hTER

4、TmRNA相對表達量分別與空白組、脂質體組、DzTiscr組相比，均下降76%左右，差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.MTT比色分析法測定細胞增殖抑制率顯示:在正常使用濃度和作用細胞的時間內，LipoDzTi組對肝癌SMMC7721細胞的增殖有抑制作用，并具有濃度依賴性和時間依賴性；LipoDzTi組分別與對照組Lipo組、LipoDzTiscr組比較，均有顯著性差異(P0.05)。4.轉染48h后端粒酶活性，TRAPPCR銀染法檢測

5、顯示:空白組、脂質體組及DzTiscr組作用48h，其TRAP產物電泳均顯示明顯的梯形條帶，亮度深；而實驗組即DzTi組，作用48h后，TRAP產物電泳顯示梯形條帶明顯減少，亮度淺。結論:本實驗設計合成的脫氧核酶能夠從基因水平上高效特異地抑制人肝癌SMMC7721細胞端粒酶hTERTmRNA的表達，降低肝癌細胞的端粒酶活性，從而抑制細胞生長。作為一種新發(fā)現的催化性核酸，脫氧核酶在腫瘤的基因治療領域中將具有及其重要的應用價值。關鍵詞:端粒