癲癇發(fā)作小鼠模型海馬活化素βA的表達(dá)及重組人活化素A的保護(hù)作用.pdf

1、癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)常見病,臨床表現(xiàn)以慢性、自發(fā)性和反復(fù)性發(fā)作為特征.其病因及發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,至今尚無根治性治療藥物.動物實(shí)驗(yàn)已證實(shí),一次長時或反復(fù)的癲癇發(fā)作可引起海馬等易損區(qū)神經(jīng)元壞死、反應(yīng)性膠質(zhì)細(xì)胞增生及苔蘚纖維發(fā)芽等病理改變,并可能是癲癇發(fā)作得以長期維持的基礎(chǔ).已經(jīng)證實(shí),有些細(xì)胞因子和生長因子促進(jìn)了以上病理變化的發(fā)生;有些則參與了對抗癇性腦損傷及癲癇發(fā)作.提示細(xì)胞因子和生長因子在癲癇后的病理機(jī)制中具有重要作用,并可能成為今后癲癇更有效治療

2、的切入點(diǎn).該研究以匹魯卡品(pilocarpine,PC)誘導(dǎo)癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus,SE)小鼠模型.發(fā)作行為按Rudge標(biāo)準(zhǔn)分為0-Ⅴ級,以出現(xiàn)Ⅱ級以上發(fā)作并持續(xù)1h為癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilpticus,SE)成模標(biāo)準(zhǔn),成模后即刻腹腔注射安定終止發(fā)作,并以成模時定為SE后1h;無明顯抽搐或呈非持續(xù)狀態(tài)(non-status epilepticus,NSE)發(fā)作小鼠列為NSE組,亦在與SE組相當(dāng)

3、時間腹腔注射安定;對照組以生理鹽水取代PC,其余處理與PC給藥鼠相同.首先應(yīng)用RT-PCR方法同時觀察了成模鼠(SE)與非成模鼠(NSE)海馬組織活化素βA mRNA表達(dá)的時程變化;應(yīng)用原位雜交及焦油紫尼氏染色方法分別觀察了SE小鼠海馬組織活化素βA mRNA表達(dá)的分布與海馬形態(tài)結(jié)構(gòu)的病理變化;接著采用非還原型SDS-PAGE和Western blotting觀察了SE與NSE小鼠海馬組織活化素A與抑制素A蛋白表達(dá)的動態(tài)變化,并同時應(yīng)用

4、RT-PCR分析了活化素受體ⅡA mRNA的表達(dá);最后通過發(fā)作程度評分、腦電圖記錄、焦油紫尼氏染色及組織原位凋亡檢測等方法觀察了預(yù)先腦室注射重組人活化素A對PC致癇作用與海馬病理變化的影響.結(jié)論:1、PC誘導(dǎo)的SE能明顯上調(diào)海馬活化素βA mRNA及活化素A蛋白的表達(dá),但對活化素受體ⅡA mRNA及抑制素A蛋白表達(dá)無明顯上調(diào)作用.2、海馬病理損害的輕重可能與活化素βA mRNA表達(dá)早晚及持續(xù)時間長短有關(guān).3、外源性活化素A可以抑制癇樣放