原癌基因c-src在大鼠精原干細(xì)胞增殖中作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探索及完善精原干細(xì)胞的分離、鑒定和體外培養(yǎng)技術(shù)：研究原癌基因c-src在體外培養(yǎng)的大鼠精原干細(xì)胞中的表達(dá)及其與精原干細(xì)胞增殖相關(guān)的信號(hào)通路。 方法：用非連續(xù)密度梯度離心及差速貼壁法分離精原干細(xì)胞；用抗端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶免疫細(xì)胞化學(xué)(TERT)鑒定精原干細(xì)胞；用MTT比色法觀察反義c-src脫氧寡核苷酸(反義c-src ODNs)對(duì)精原干細(xì)胞增殖的量效關(guān)系及時(shí)效關(guān)系；用RT-PCR檢測(cè)原癌基因c-src mRNA的表達(dá)情況；用w

2、estern blot檢測(cè)c-Sre蛋白、磷酸化的ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)和磷酸化的STAT3蛋白(p-STAT3)的表達(dá)情況。 結(jié)果：非連續(xù)密度梯度離心及差速貼壁法分離的精原干細(xì)胞，其TERT免疫細(xì)胞化學(xué)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)平均值為90.5％；與空白對(duì)照組相比，10 μmol/L反義c-src ODNs組作用12 h后精原干細(xì)胞的增殖抑制率為12.6％(P＜0.05)，且c-src mRNA水平明顯下調(diào)(P＜0.05)；we

3、stern blot結(jié)果顯示反義c-src ODNs組c-Src蛋白、p-STAT3蛋白和p-ERK1/2蛋白的表達(dá)與空白對(duì)照組相比分別下降了33.8％(P＜0.01)，45.3％(P＜0.01)和38.4％(P＜0.01)。 結(jié)論：非連續(xù)密度梯度離心結(jié)合差速貼壁法是分離精原干細(xì)胞的有效方法；TERT免疫細(xì)胞化學(xué)證實(shí)本實(shí)驗(yàn)所獲得的細(xì)胞是高純度的精原干細(xì)胞；原癌基因c-src可以促進(jìn)精原干細(xì)胞的增殖；c-Src蛋白可能通過(guò)p-ST