原癌基因c-src在精原干細胞中表達及作用的研究.pdf

1、目的：探索及完善精原干細胞的分離、鑒定和體外培養(yǎng)技術；研究原癌基因c-src對體外培養(yǎng)的精原干細胞存活及與凋亡密切相關的csspase-3表達的影響。方法：非連續(xù)密度梯度離心及差速貼壁法分離精原干細胞；c-Kit和TERT細胞免疫組織化學鑒定精原干細胞；用MTT比色法檢測精原干細胞的存活及增殖情況，觀察AS-src對精原干細胞存活的劑量性影響及AS-src對精原干細胞存活的時間性影響；用RT-PCR檢測c-src mRNA和caspas

2、e-3 mRNA的表達情況。 結果：非連續(xù)密度梯度及差速貼壁法分離精原干細胞，臺盼藍染色計數(shù)細胞存活率分別為92.5％和92.1％；分離后所獲取的細胞c-Kit和TERT免疫組織化學陽性細胞數(shù)平均值分別為90.8±1.O％和91.7±1.2％；精原干細胞在含10％NBS的DMEM中培養(yǎng)96h時增殖達高峰；10μmol/lAS-src作用12h后精原干細胞存活率下降(P＜O.05)，于24h，48h，72h持續(xù)下降(P＜0.01)；與

3、S-src和空白對照組相比，AS-src組c-srcmRNA水平明顯下調，而caspase-3 mRNA表達水平明顯上調。結論：非連續(xù)密度梯度結合差速貼壁法是分離精原干細胞的有效方法；以c-Kit及TERT作為marker分子通過免疫組織化學檢測為精原干細胞的鑒定提供較為充分的依據(jù)；精原干細胞可以在含10％NBS的DMEM培養(yǎng)基中短期增殖；c-Src可以促進精原干細胞的存活；c-Src可能通過PI-3K/PKB途徑，導致Caspase-