絲膠對2型糖尿病大鼠胰腺胰島素PI3K-Akt信號通路的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、近年來，糖尿病的發(fā)病率逐年增加，與心血管疾病、惡性腫瘤一起成為威脅人民健康的多發(fā)病，致殘率、致死率較高，并且超過85％為2型糖尿病。2型糖尿病主要以血糖升高、胰島素抵抗以及胰島β細(xì)胞功能受損等為主要特征，如何降低血糖、保護胰島、促進β細(xì)胞分泌胰島素是治療2型糖尿病的關(guān)鍵。
　　絲膠是分子量為10-300KD，由18種氨基酸組成的高分子水溶性蛋白。絲膠的含量約占蠶絲總量的25%，但在繅絲和精煉時極大部分被除去，造成了極大的浪費。本課

2、題組前期研究發(fā)現(xiàn)，絲膠具有良好的降血糖作用，但具體機制尚不清楚。本研究采用高脂高糖飼料聯(lián)合鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的方法建立2型糖尿病大鼠模型，探討絲膠對2型糖尿病大鼠胰腺胰島素PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的干預(yù)作用，為治療和防治糖尿病并發(fā)癥開辟新途徑。
　　目的：
　　通過觀察絲膠對2型糖尿病大鼠胰腺胰島素受體(Insulin Receptor，IR)、胰島素受體底物-1(InsulinReceptor Substrate-1，IR

3、S-1)、磷脂酰肌醇-3-激酶（Phosphatidylinositol3-Kinase，PI3K）和蛋白激酶B（Protein Kinase B，Akt/PKB）表達的作用，探討絲膠對2型糖尿病大鼠胰腺胰島素PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用及可能機制。
　　方法：
　　1.60只SPF級雄性SD大鼠隨機分為5組：正常對照組（NC組）、糖尿病模型組（DM組）、絲膠治療高劑量組（HS組）、絲膠治療低劑量組（LS組）、陽性對照

4、組（PC組），每組12只。采用高脂高糖飼料聯(lián)合鏈脲佐菌素（35mg/kg，2次）腹腔注射的方法建立大鼠2型糖尿病模型，以空腹血糖≥11.1mmol/L作為成模標(biāo)準(zhǔn)。待模型成功建立后，HS組大鼠給予2.4g/kg的絲膠連續(xù)灌胃35d，LS組大鼠給予1.8g/kg的絲膠連續(xù)灌胃35d，PC組大鼠給予55.33mg/kg的二甲雙胍灌胃35d；NC組和DM組大鼠給予同等劑量生理鹽水灌胃35d。
　　2.釆用葡萄糖氧化酶法檢測各組大鼠的空腹

5、血糖。
　　3.采用ELISA法檢測大鼠血清胰島素（Insulin，INS)和脂聯(lián)素(Adiponectin，ADP)水平。
　　4.采用Western Blotting法檢測各組大鼠胰腺IR、IRS-1、PI3K、Akt/PKB蛋白的表達。
　　5.釆用實時定量熒光PCR（Real-time FQ-PCR)法檢測各組大鼠胰腺IR、IRS-1和PI3K、Akt/PKB mRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1.

6、各組大鼠的血糖：NC組大鼠的血糖為(10.83±2.03)mmol/L，DM組組大鼠的血糖為(29.45±4.82)mmol/L，明顯高NC組(P＜0.05)；HS組、LS組、PC組大鼠的血糖分別為（13.20±4.09）mmol/L、（13.18±2.30）mmol/L、（10.04±2.29）mmol/L，均明顯低于DM組（P＜0.05）；且HS組、LS組與PC組血糖水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.各組大

7、鼠血清INS水平：
　　NC組大鼠血清INS水平為(11.45±1.72)μg/L，DM組大鼠血清INS水平為(7.28±0.58)μg/L，明顯低于NC組(P＜0.05)；HS組、LS組、PC組大鼠血清INS水平分別為（12.65±2.17）μg/L、（13.30±1.64）μg/L、（11.13±0.99）μg/L，均明顯高于DM組（P＜0.05）；且HS組、LS組與PC組血糖水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

8、>　　3.各組大鼠血清ADP水平：
　　NC組大鼠血清ADP水平為(70.11±18.08)μg/L，DM組大鼠血清ADP水平為(49.36±12.91)μg/L，明顯低于NC組(P＜0.05)；HS組、LS組、PC組大鼠血清ADP水平分別為（95.20±26.80）μg/L、（76.77±10.17）μg/L、（83.50±4.63）μg/L，均明顯高于DM組（P＜0.05）；且HS組、LS組與PC組血糖水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意

9、義（P＞0.05）。
　　4.各組大鼠胰腺IR的表達：與NC組比較，DM組大鼠胰腺IR蛋白及mRNA的表達明顯降低（P＜0.05）；HS組、LS與PC組大鼠胰腺IR蛋白及mRNA的表達較DM組明顯升高（P＜0.05），且HS組、LS組與PC組血糖水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5.各組大鼠胰腺IRS-1的表達：與NC組比較，DM組大鼠胰腺IRS-1蛋白及mRNA的表達明顯降低（P＜0.05）；HS組、LS組

10、與PC組大鼠胰腺IRS-1蛋白及mRNA的表達較DM組明顯升高（P＜0.05），且HS組、LS組與PC組血糖水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6.各組大鼠胰腺PI3K的表達：與NC組比較，DM組大鼠胰腺PI3K蛋白及mRNA的表達明顯降低（P＜0.05）；HS組、LS組與PC組大鼠胰腺PI3K蛋白及mRNA的表達較DM組大鼠明顯升高（P＜0.05）；且HS組、LS組與PC組血糖水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.0

11、5）。
　　7.各組大鼠胰腺Akt的表達：與NC組比較，DM組大鼠胰腺Akt蛋白及mRNA的表達明顯降低（P＜0.05）；HS組、LS組與PC組大鼠胰腺Akt蛋白及mRNA的表達較DM組明顯升高（P＜0.05）；且HS組、LS組與PC組血糖水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　絲膠可通過上調(diào)糖尿病模型大鼠胰腺IR、IRS-1、PI3K和AKT的表達，改善糖尿病時胰腺胰島素PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)