Poldip2在胰島素信號通路中的作用及對2型糖尿病脂代謝的調(diào)節(jié).pdf

1、目的：本研究旨在研究細胞水平中高糖對細胞的脂代謝作用及poldip2的表達水平；并研究2型糖尿病小鼠注入Poldip2腺病毒后對胰島素信號通路中的作用及對KKAy小鼠脂代謝的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：（1）將McArdle7777細胞分別培養(yǎng)于高糖培養(yǎng)基和正常葡萄糖培養(yǎng)基中，檢測在高糖和正常葡萄糖培養(yǎng)下TG, TCH水平及Poldip2的表達情況。（2）利用不同胰島素劑量建立不同水平的胰島素抵抗，檢測Poldip2在胰島素作用下的劑量

2、反應關(guān)系、時間效應關(guān)系；以及在胰島素最優(yōu)劑量和時間下，Poldip2對McArdle7777細胞的脂代謝作用。（3）體內(nèi)實驗中，KKAy小鼠經(jīng)過4周高脂飲食后，將KKAy小鼠隨機分為Poldip2病毒組；GFP組；Saline組。此外，將C57BL/6J小鼠作為空白對照組測定小鼠中血脂四項，餐后脂耐受水平，血清游離脂肪酸，胰島素，瘦素，肝臟脂水平，肝臟中PTP1B酶活性、H2O2水平，并檢測胰島素信號通路中相關(guān)蛋白的表達水平。
　

3、　結(jié)果：細胞實驗中，高糖情況下Poldip2的表達水平顯著下降，同時高糖刺激能夠降低脂代謝水平。在胰島素刺激實驗中，正常葡萄糖下，胰島素劑量為20μmol，24h內(nèi)Poldip2蛋白的表達最為豐富；高糖下，胰島素劑量5μmol，培養(yǎng)6h后Poldip2的表達最為豐富，其細胞TCH水平顯著高于未加胰島素刺激下的TCH水平。同時發(fā)現(xiàn)在高糖培養(yǎng)下，較低劑量的胰島素，就會使Poldip2的表達抑制。
　　體內(nèi)動物試驗中，Poldip2腺病

4、毒能夠顯著改善KKAy小鼠的血糖水平,并能降低血清中TG, TCH, LDL-C及肝臟中TCH的水平；降低血清中游離脂肪酸及胰島素水平；對小鼠新鮮肝臟中PTP1B酶活性和H2O2的檢測發(fā)現(xiàn)，Poldip2能提高肝臟中H2O2水平，并顯著降低PTP1B酶的活性；通過餐后脂耐受水平檢測發(fā)現(xiàn)Poldip2可加速小鼠外源性脂肪代謝。通過對胰島素信號通路中相關(guān)蛋白的檢測，Poldip2能夠降低KKAy小鼠中PTEN, PTP1B蛋白的表達，激活A

5、kt的活性進而促進胰島素信號通路的傳遞；另外 Poldip2可能通過降低PEPCK蛋白的表達，進而抑制糖異生的合成,使肝糖葡萄糖輸出減少。
　　結(jié)論：細胞在高糖培養(yǎng)下發(fā)現(xiàn)高糖對細胞具有高毒作用，產(chǎn)生了脂代謝紊亂，這可能與細胞在高糖培養(yǎng)下Poldip2的蛋白水平下降相關(guān)。Poldip2能夠扭轉(zhuǎn)外源性脂代謝的異常，改善小鼠的脂代謝情況。Poldip2改善糖尿病小鼠糖脂代謝的機制可能是通過 Poldip2的表達升高，激活 Nox4產(chǎn)生