混合模式色譜柱在抗生素質(zhì)量分析中的應(yīng)用暨頭孢曲松降解雜質(zhì)研究.pdf

1、本論文主要研究了兩性離子交換-反相-親水作用（ZIC-RP-HILIC）混合模式色譜柱的應(yīng)用及其機(jī)理；并利用ZIC-RP-HILIC-MS聯(lián)用技術(shù)，確證第三代頭孢菌素類抗生素頭孢曲松的降解雜質(zhì)，考察此藥物的穩(wěn)定性，并對(duì)新發(fā)現(xiàn)的頭孢曲松色譜行為互變現(xiàn)象進(jìn)行研究，建立更加科學(xué)、全面的質(zhì)量控制方法。
　　Ⅰ兩性離子交換-反相-親水作用（ZIC-RP-HILIC）混合模式色譜柱的應(yīng)用及機(jī)理研究
　　目的：利用兩性離子交換-反相-親水

2、作用（ZIC-RP-HILIC）混合模式色譜柱的不同分離模式，1.建立一種藥物鹽離子含量測(cè)定的方法，彌補(bǔ)藥典中藥物成鹽量質(zhì)控方法的空白；2.代替離子對(duì)試劑分離分析強(qiáng)極性化合物，建立一種強(qiáng)極性化合物雜質(zhì)分離、結(jié)構(gòu)確證的方法；提出一種新的二維色譜雜質(zhì)峰相互識(shí)別的方法及雜質(zhì)結(jié)構(gòu)確證的途徑，尤其解決了強(qiáng)極性化合物結(jié)構(gòu)確證難的問題（即離子對(duì)試劑與MS不相容的問題）；3.探討該色譜柱的分離機(jī)制，以便快速篩選適合分離的化合物，給實(shí)際分析工作帶來方便。

3、
　　方法：1.采用ZIC-RP-HILIC混合模式色譜柱-蒸發(fā)光檢測(cè)器（ZIC-RP-HILIC– ELSD），乙酸銨緩沖鹽，建立抗生素藥物成鹽離子的含量測(cè)定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證；2.利用ZIC-RP-HILIC混合模式色譜-RP色譜-柱切換技術(shù)，以青霉素V鉀、苯唑西林鈉、頭孢曲松鈉為例，建立了常規(guī)藥典RP色譜方法和ZIC-RP-HILIC混合模式色譜方法的二維相關(guān)色譜分析方法，對(duì)RP和ZIC-RP-HILIC色譜系統(tǒng)中的降

4、解雜質(zhì)峰進(jìn)行相互識(shí)別，并利用MS技術(shù)確定雜質(zhì)結(jié)構(gòu)；3.利用Discover studio軟件預(yù)測(cè)藥物分子的結(jié)構(gòu)參數(shù)，探討ZIC-RP-HILIC混合模式色譜柱與化合物性質(zhì)之間的關(guān)系，確定該色譜柱的適用范圍。
　　結(jié)果：1.建立了一種新的HPLC測(cè)定藥物鹽離子含量的方法，該方法準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)便；2.建立了一種 ZIC-RP-HILIC混合模式色譜-RP色譜二維色譜相關(guān)分析法，進(jìn)行抗生素雜質(zhì)研究，實(shí)驗(yàn)證明該方法簡(jiǎn)單易行，在代替離子對(duì)

5、試劑對(duì)強(qiáng)極性化合物雜質(zhì)進(jìn)行分離和結(jié)構(gòu)確證方面有較大優(yōu)勢(shì)；3.找出了與化合物色譜行為密切相關(guān)的四個(gè)化合物參數(shù)，確定了該色譜柱適合分析的化合物類型。
　　結(jié)論：ZIC-RP-HILIC混合模式色譜柱在離子交換模式下（高鹽相）分離藥物鹽離子、在親水模式下（高有機(jī)相）分離強(qiáng)極性化合物方面有較大優(yōu)勢(shì)，并且其流動(dòng)相為揮發(fā)性緩沖鹽，易于MS匹配，用于雜質(zhì)結(jié)構(gòu)確證。利用線性自由能方程式描述色譜柱與化合物性質(zhì)之間的關(guān)系，是一種表征色譜柱性能的良好方

6、法。
　?、蝾^孢曲松降解雜質(zhì)研究
　　目的：由于頭孢曲松強(qiáng)極性的特點(diǎn)，其分離方法為反相離子對(duì)色譜法，該分離方法操作復(fù)雜，不易與MS聯(lián)用，并且頭孢曲松在有機(jī)酸中降解嚴(yán)重，結(jié)合ZIC-RP-HILIC混合模式色譜柱的特點(diǎn)，進(jìn)行頭孢曲松降解動(dòng)力學(xué)研究和降解雜質(zhì)研究，對(duì)新發(fā)現(xiàn)的頭孢曲松色譜行為互變現(xiàn)象進(jìn)行研究，建立頭孢曲松更加全面、科學(xué)的質(zhì)量控制方法。
　　方法：本文以頭孢曲松為研究對(duì)象，進(jìn)行加速穩(wěn)定性試驗(yàn)，考察各影響因素對(duì)頭

7、孢曲松降解速率的影響；利用ZIC-RP-HILIC混合模式色譜柱-MS聯(lián)用技術(shù)確定頭孢曲松降解雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)了一種頭孢曲松在色譜中的互變共存結(jié)構(gòu)，利用NMR技術(shù)確定該共存化合物的結(jié)構(gòu)，并找出其產(chǎn)生的原因。
　　結(jié)果：頭孢曲松在有機(jī)酸中（甲酸、乙酸），三位側(cè)鏈易發(fā)生水解反應(yīng)，生成含羥基化合物和三氮唑，并在不同 pH下產(chǎn)生不同的電離狀態(tài)，在色譜中表現(xiàn)出不同的保留時(shí)間，這種現(xiàn)象在離子對(duì)試劑存在下異常顯著。因此在利用反相離子對(duì)色譜分離含