傷寒沙門菌耐藥質(zhì)粒pRST98在小鼠體內(nèi)向大腸埃希菌接合轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目的：研究傷寒沙門菌耐藥質(zhì)粒pR<,ST98>在小鼠體內(nèi)向大腸埃希菌的接合轉(zhuǎn)移，比較質(zhì)粒在體內(nèi)外接合轉(zhuǎn)移的異同及影響因素。 方法：由于傷寒沙門菌是一種嚴格只對人類致病的病原菌，沒有合適的動物模型，因此將傷寒沙門菌的耐藥質(zhì)粒pR<,ST98>導(dǎo)入遺傳背景明確的鼠傷寒沙門菌低毒株RIA中，形成接合子pR<,ST98>/RIA，口飼BALB/c小鼠進行體內(nèi)耐藥質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移的研究。 1．將傷寒沙門菌耐藥質(zhì)粒pR<,ST98>導(dǎo)入

2、大腸埃希菌E coliK<,12>W<,1485>(F)Rif<'r>Lac<'+>，獲得接合子pR<,ST98>/E．coliK<,12>W<,1485>，再以接合子pR<,ST98>/E．coliK<,12>W<,1485>為供體，將pR<,ST98>導(dǎo)入鼠傷寒沙門菌低毒株RIA，獲得接合子pR<,ST98>/RIA。用藥敏試驗和質(zhì)粒檢測接合子的形成。 2．用SS培養(yǎng)基分離培養(yǎng)未經(jīng)人工感染小鼠體內(nèi)的大腸埃希菌，生化反應(yīng)鑒定獲

3、得的菌株，用藥敏試驗和質(zhì)粒譜調(diào)查小鼠腸道細菌耐藥和質(zhì)粒攜帶狀況。比較小鼠腸道分離菌株耐藥譜和pR<,ST98>編碼的耐藥性差異，以此制備SS抗生素選擇性培養(yǎng)基。 3．20只5周齡BALB/c小鼠，雌雄各半，體重18-20g，每組5只隨機分為4組，以低于pR<,ST98>/RIA半數(shù)致死量(LD<,50>)的四種菌量(10<'8>、10<'7>、10<'6>、10<'5>CFU/ml)分別口飼4組小鼠。從第2天起至30天每天用SS

4、抗生素選擇性培養(yǎng)基分離小鼠腸道大腸埃希菌。用生化反應(yīng)鑒定后藥敏試驗確定耐藥譜，并進一步用質(zhì)粒檢測驗證pR<,ST98>在小鼠腸道內(nèi)發(fā)生的接合轉(zhuǎn)移。 結(jié)果：1．在體外傷寒沙門菌很容易將耐藥質(zhì)粒pR<,ST98>轉(zhuǎn)移給大腸埃希菌E coliK<,12>W<,1485>(F)Rif<'r>Lac<'+>，接合子pR<,ST98>/E．coliK<,12>W<,1485>又可將pR<,ST98>轉(zhuǎn)移給鼠傷寒沙門菌RIA，但在不同種屬中p

5、R<,ST98>接合難易程度不同，同一質(zhì)粒在不同宿主菌中耐藥標志的表達亦有差異。接合子pR<,ST98>/E．coliK<,12>W<,1485>中Sm和Gm耐藥標志未表達，接合子pR<,ST98>/RIA中除Sm和Gm外，Cos的耐藥標志亦未表達。 2．從未經(jīng)人工感染小鼠腸道分離了100株大腸埃希菌，所有菌株均有不同程度的耐藥，其中對Ap的耐藥率高達97％，Sm的耐藥率為42％，但所有菌株對Akn和Cp均敏感。未發(fā)現(xiàn)分離的小鼠

6、腸道菌與pR<,ST98>有相同的耐藥譜，據(jù)此分別選擇Cm和Cp兩種抗生素制備SS抗生素選擇性培養(yǎng)基。質(zhì)粒檢測未發(fā)現(xiàn)小鼠腸道菌有分子量與pR<,ST98>相近的耐藥質(zhì)粒存在。 3．口飼pR<,ST98>/RIA后，第2天SS抗生素選擇性培養(yǎng)基即可篩選到耐受pRsT98編碼抗藥性的紅色菌落，陽性率為40％(8/20)，第3天為65％(13/20)，第4天為80％(16/20)。第8、11和16天，菌量為10<'8>CFU/ml組小

7、鼠各死亡1只，第13天菌量為10<'7>CFU/ml組小鼠死亡1只，至第30天共死亡4只。第30天抗生素選擇性培養(yǎng)基分離菌株的陽性率為81％(13/16)?？陲昿R<,ST98>/RIA菌量與各組小鼠間腸道菌陽性分離率未見有直接關(guān)系。經(jīng)生化反應(yīng)鑒定，分離的菌株均為大腸埃希菌。藥敏試驗傷寒沙門菌耐藥質(zhì)粒pR<,ST98>在小鼠體內(nèi)向大腸埃希菌接合轉(zhuǎn)移的研究顯示陽性菌株的耐藥譜發(fā)生改變，新出現(xiàn)的部分耐藥標志與pR<,ST98>的耐藥譜相符，

8、但有些抗生素的耐藥標記未能全部表達。質(zhì)粒檢測顯示體內(nèi)形成的接合子均含耐藥質(zhì)粒pR<,ST98>。 結(jié)論：1．在體外耐藥質(zhì)粒pR<,ST98>可以從傷寒沙門菌S. typhi轉(zhuǎn)移給大腸埃希菌E. coliK<,12>W<,1485>，接合子pR<,ST98>/E．coliK<,12>W<,1485>又可將質(zhì)粒轉(zhuǎn)移給鼠傷寒沙門菌S. typhimuriumRIA。2．從未經(jīng)人工感染小鼠體內(nèi)分離的大腸埃希菌藥敏試驗發(fā)現(xiàn)，所有菌株對抗生