基于NF-κB與COX-2信號的艷山姜揮發(fā)油對LPS誘導血管內(nèi)皮細胞損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、自卡薩尼絲提出“人與動脈同壽”的觀點，血管內(nèi)皮細胞生理功能與病理的變化成為人類健康研究的熱點之一。大量研究結果證實，心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生和發(fā)展與血管內(nèi)皮細胞損傷密切相關，而炎癥反應是內(nèi)皮細胞損傷關鍵的病理機制。民族藥艷山姜為姜科山姜屬植物艷山姜Alpiniazerumbet（Pers.)Burtt et Smith的干燥成熟果實，貴州民間廣泛用于心血管系統(tǒng)疾患的防治。實驗室前期研究證實，揮發(fā)油（EOFAZ）是其主要藥效部位之一，具有抗炎

2、、改善血管內(nèi)皮功能及氧化應激狀態(tài)等藥理作用。
　　目的：研究艷山姜揮發(fā)油（EOFAZ）對脂多糖(LPS)誘導的人主動脈內(nèi)皮細胞(HAEC)損傷的保護作用，并進一步闡明其對NF-κB及COX-2信號的調控，為其臨床應用提供實驗基礎與理論指導。
　　方法：本實驗以傳代培養(yǎng)4-5代的人主動脈內(nèi)皮細胞（HAEC，ScienCell）為研究對象。觀察不同濃度EOFAZ（低劑量：50ng/ml；高劑量：100ng/ml）對脂多糖（LPS

3、，1μg/ml）誘導炎癥損傷的保護作用，同時選取阿托伐他汀（Atv，5μM）、阿司匹林（Asp，2mM）作為陽性對照藥。通過MTT法、LDH外露率、Giemsa染色和HE染色判斷HAEC損傷；Tunel染色觀察EOFAZ、Atv、Asp對LPS誘導HAEC凋亡的保護作用；RT-PCR檢測EOFAZ、Atv、Asp對LPS誘導HAECICAM-1、COX2 mRNA表達的影響；蛋白免疫印跡法（Western blotting）分析EOFA

4、Z、Atv、Asp對LPS誘導HAEC NF-κB激活及對COX-2表達的影響。
　　結果：MTT實驗結果表明，LPS（1μg/ml）處理12h后OD值明顯下降，而EOFAZ（50ng、100ng）、Atv（5μM）、Asp（2mM）干預后OD值明顯升高；LDH外露率實驗結果提示，LPS（1μg/ml）處理12h后，LDH外露率明顯提高，各組藥物干預后LDH外露率明顯降低；tunel染結果表明，LPS（1μg/ml）處理12h后t

5、unel染色陽性細胞數(shù)增加（細胞核呈黃褐色），蘇木素復染后藍紫色細胞明顯減少，而各組藥物干預后tunel染色陽性細胞明顯減少。LPS（1μg/ml）可誘導HAEC ICAM-1、COX2 mRNA及蛋白表達上調；NF-κB p65磷酸化增加、IκBα降解增多。EOFAZ（50ng、100ng）、Atv（5μM）、Asp（2mM）對LPS誘導的HAEC損傷具有不同程度的保護作用：①各組藥物干預后細胞活力增加、凋亡細胞減少；②各組藥物干預后

6、均可抑制ICAM-1 mRNA及蛋白的表達；③EOFAZ（50ng、100ng）、Asp（2mM）降低COX-2 mRNA及蛋白的表達；④EOFAZ（50ng、100ng）、Atv（5μM）、Asp（2mM）均抑制 NF-κB激活，穩(wěn)定 IκBα，EOFAZ具有一定的劑量正相關性。
　　結論：LPS誘導HAEC損傷與NF-κB及COX-2信號密切相關；EOFAZ對LPS誘導的血管內(nèi)皮細胞炎性損傷具有保護作用，其作用機制可能與穩(wěn)定