綠原酸對(duì)高糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及其對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：現(xiàn)如今人們生活條件逐漸提升，生活方式也開(kāi)始有了新的變化，糖尿病患病率逐年遞增，糖尿病急性并發(fā)癥發(fā)生率及病死率日益減少，糖尿病慢性并發(fā)癥如大血管病逐漸成為導(dǎo)致糖尿病患者死亡的主要原因。綠原酸(Chlorogenic acid CGA)是人類(lèi)日常飲食中一種常見(jiàn)的多元酚類(lèi)物質(zhì)，一些研究證實(shí)CGA通過(guò)抗氧化清除反應(yīng)性氧化物ROS、抗炎作用等對(duì)血管損傷起到一定保護(hù)作用。NF-κB是細(xì)胞核中起到很重要作用的轉(zhuǎn)錄因子，參與多種基因的表達(dá)和調(diào)控。

2、本研究將觀察CGA對(duì)高糖誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞凋亡發(fā)揮何種調(diào)節(jié)作用，并探討CGA的這一作用是否與NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。
　　方法：⑴取5～9代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞(EA.hy926)，用無(wú)血清培養(yǎng)基饑餓24h，更換實(shí)驗(yàn)用液隨機(jī)分配為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。⑵應(yīng)用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞活性;Hoechst33258熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡;運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)（AnnexinⅤ-FITC/PI試劑盒、活性氧檢測(cè)試劑盒）檢測(cè)細(xì)胞凋

3、亡及ROS活性氧產(chǎn)生;western-blot技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞phospho-NF-κB p65、IκBα蛋白表達(dá)及活性。
　　結(jié)果：①根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們選用15、25umol/L濃度的CGA進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。②熒光顯微鏡下觀察到經(jīng)過(guò)Hoechst33258染色后，正常對(duì)照組染色質(zhì)結(jié)構(gòu)正常，呈均勻熒光;高滲組與對(duì)照組無(wú)明顯差異;高糖組細(xì)胞凋亡明顯增多;高糖+綠原酸組細(xì)胞凋亡較高糖組有所減少，但凋亡細(xì)胞仍多于正糖對(duì)照組。③流式細(xì)

4、胞儀分析凋亡，與對(duì)照組相比，高糖增加內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率;高滲組與對(duì)照組無(wú)明顯差異;而高糖+CGA組與高糖組比較細(xì)胞凋亡率明顯下降。④流式細(xì)胞儀分析活性氧產(chǎn)生，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，高糖組培養(yǎng)48h細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生明顯升高，而CGA預(yù)處理18h后可以逆轉(zhuǎn)高糖所致細(xì)胞內(nèi)ROS的升高;高滲組與對(duì)照組無(wú)明顯差異。⑤高糖培養(yǎng)48h后與對(duì)照組比較NF-κB p65蛋白表達(dá)增加，IκB-α蛋白表達(dá)減少;而高糖+綠原酸組與高糖組比較NF-κB p65蛋白