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文檔簡介
1、靈芝(Ganoderma)是一種藥用價值很高的名貴真菌,靈芝三萜是其主要活性物質(zhì)之一;硒是生命活動的必需元素,二者對許多疾病都有防治作用。在綜合了近年來靈芝三萜類成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)、藥理活性成果以及硒化合物的抗癌作用和機理,總結(jié)了靈芝三萜和硒化合物的研究現(xiàn)狀基礎(chǔ)之上,本實驗首次嘗試將三萜和硒進行有機結(jié)合,以期達(dá)到優(yōu)化其生理和藥理功能的目的。 首先,建立了靈芝發(fā)酵菌絲三萜類化合物含量的檢測方法。即:以齊墩果酸作為標(biāo)準(zhǔn)品,用香草醛-高氯
2、酸發(fā)色體系進行比色,確定靈芝發(fā)酵菌絲三萜含量測定的最佳反應(yīng)條件:水浴揮干樣品的氯仿溶液,加入0.3ml5﹪香草醛-冰醋酸、1.0ml高氯酸、反應(yīng)溫度為70℃、反應(yīng)時間為25分鐘進行顯色反應(yīng),光吸收波長為550nm。 其次,本實驗通過生物轉(zhuǎn)化將硒富集到靈芝菌絲體中。實驗證明:靈芝具有較強的富硒能力,可以在400ug/g的改良PDA培養(yǎng)基上正常生長,菌絲體干重收獲率約為1﹪,經(jīng)過乙醇提取、氯仿萃取,得粗富硒靈芝三萜(rSeGT)的收
3、獲率約為3.97﹪,、進一步經(jīng)硅膠柱層析,獲得四種富硒靈芝三萜組分(SeGT1,SeGT2.SeGT3,SeGT4),且各組分富硒能力不同,以SeGT1富硒能力最強,為21.03ug/g。 第三,用MTT法對乙醇提取物(EEG)、氯仿萃取物(rSeGT)、及硅膠柱層析各組分(SeGT1、SeGT2、SeGT3、SeGT4)進行的體外抑瘤效果進行分析,發(fā)現(xiàn)除SeGT4外均對K562細(xì)胞具有抑制作用,其中以SeGT1效果最佳,作用7
4、2h抑制率達(dá)78.14﹪,明顯比陽性對照組GT1(不富硒的三萜組分)高;形態(tài)觀察可見細(xì)胞膜破損,細(xì)胞變形或出現(xiàn)胞芽和縊痕,透明度和亮度降低,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)有異物感的顆粒,細(xì)胞增殖被抑制,活細(xì)胞數(shù)減少;電鏡下觀察到:細(xì)胞皺縮變小,胞漿致密,核固縮,染色質(zhì)濃集、邊聚化,形成不同形狀大小的塊狀,胞質(zhì)空泡化等。DNA電泳圖明顯具有凋亡細(xì)胞的DNA梯度條帶;流式細(xì)胞儀分析顯示:SeGT1作用細(xì)胞后S期細(xì)胞DNA的合成量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于G1期細(xì)胞DNA合成量的
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