Notch-Runx1信號(hào)通路在VEGF促大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞增殖中的作用.pdf

1、[目的]
　　 本實(shí)驗(yàn)使用Notch通路阻斷劑DAPT以阻斷Notch-Runx1信號(hào)傳導(dǎo)通路，觀察其對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)作用下大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)增殖及Notch-Runx1通路相關(guān)基因mRNA的影響，研究Notch-Runx1信號(hào)傳導(dǎo)通路在VEGF促進(jìn)大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞增殖中的作用。
　　 [方法]
　　 (1)體外培養(yǎng)大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)研究。
　　 (2)

2、實(shí)驗(yàn)分為4組，分別為對(duì)照組，VEFG組，DAPT組，兩藥組(VEGF+DAPT)。
　　 (3)顯微鏡下(100×)觀察各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　 (4)應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞增殖情況。
　　 (5)應(yīng)用RT-PCR法分別檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組Notch-Runx1通路相關(guān)基因(Notch1、Notch2、Flk-1、HES-1、RUNX-1)mRNA水平的變化。
　　 [結(jié)果]
　

3、　 (1)各實(shí)驗(yàn)組在培養(yǎng)72h后，與對(duì)照組相比，VEGF組細(xì)胞數(shù)目明顯增多，形態(tài)活性較好，而DAPT組和兩藥組細(xì)胞形態(tài)變圓脫落，數(shù)目明顯減少。
　　 (2)各時(shí)間點(diǎn)(24h，48h，72h) VEGF組存活率均最高，而DAPT組及兩藥組存活率均較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，提示VEGF對(duì)BMSCs有明顯的促進(jìn)作用，而這種促進(jìn)作用可被DAPT所抑制。
　　 (3)與對(duì)照組相比，VEGF組的Notch1、Not

4、ch2和Flk-1基因的表達(dá)水平均有上調(diào)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而DAPT組及兩藥組Notch1和Notch2的表達(dá)水平稍下調(diào)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。DAPT組及兩藥組的Flk-1基因表達(dá)水平稍有下調(diào)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 (4) HES-1在VEGF組其表達(dá)水平下調(diào)，在DAPT與兩藥組中其表達(dá)水平上調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (5) RUNX-1基因

5、的表達(dá)水平在VEGF組有所降低,而在兩藥組有所提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，DAPT組的RUNX-1基因表達(dá)水平稍有增高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)使用DAPT阻斷Notch通路并檢測(cè)VEGF對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖作用以及Notch-Runx1信號(hào)通路相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平的影響，推測(cè)VEGF促大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的作用很可能是通過(guò)Notch-Runx1信號(hào)通路