在增殖相關(guān)信號刺激下，大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)鈣離子信號的研究.pdf

1、目的：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是一類來源于哺乳動物骨髓的成體干細(xì)胞。體內(nèi)和體外研究發(fā)現(xiàn)它們能自我更新，具較強(qiáng)增殖能力和多向分化潛力。目前，增殖和分化調(diào)控機(jī)理是MSCs研究熱點和難點，而胞內(nèi)鈣離子信號調(diào)控也是細(xì)胞生物學(xué)研究熱點。但是，Ca<'2+>如何參與。MSCs增殖調(diào)控并不清楚。本實驗利用物理和化學(xué)信號刺激MSCs，促進(jìn)和抑制其增殖，研究在這些信號介導(dǎo)的增殖過程中，胞內(nèi)Ca<'2+>信號的調(diào)控。 方法：首先，分離、純化、培

2、養(yǎng)和鑒定SD大鼠MSCs。結(jié)合血清饑餓法和nocodazole分裂期阻斷法將第3～5代的：MSCs同步化于G<,1>期。然后分別用10％胎牛血清、15 ng/ml表皮生長因子短期(1 h)刺激和持續(xù)(32 h)刺激G<,1>期細(xì)胞，檢測胞內(nèi)Ca<'2+>濃度的變化；用10 μg/ml絲裂霉素C短期(1 h)刺激MSCs，檢測胞內(nèi)Ca<'2+>濃度的變化；用10 μg/ml絲裂霉素C處理2.5 h后除去，在正常培養(yǎng)液中培養(yǎng)MSCs細(xì)胞32

3、 h，在不同時間點檢測胞內(nèi)Ca<'2+>濃度的變化。最后，利用微接觸印刷技術(shù)將MSCs控制成底面積為900 μm<'2>的正方形、矩形、圓形、橢圓形等幾何圖案，觀察圖案化對其增殖能力的影響，檢測圖案化細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>濃度的變化。 結(jié)論：獲得同步化于G<,1>期的.MSCs。10％胎牛血清和15 ng/ml表皮生長因子促進(jìn)MSCs增殖；用它們短期刺激細(xì)胞，胞內(nèi)Ca<'2+>濃度立即增加并保持在較高水平。10μg/ml絲裂霉素C