靶向CⅡTA的siRNA抑制異體角膜緣移植排斥的實驗研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文靶向CⅡTA的siRNA抑制異體角膜緣移植排斥的實驗研究姓名：張雪菲申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：陳家祺20060401張雪菲博士學(xué)位論文：靶向C l l T A 的s i R N A 抑制異體角膜緣移植排斥的實驗研究 中文摘要已經(jīng)有報告表明體內(nèi)應(yīng)用s i P , N A 能成功抑制刪P _ 9 的表達(dá)進(jìn)而抑制腫瘤新生血管的產(chǎn)生嘲。本課題以M H C I I 基因的主要調(diào)控因子c ⅡT A 為靶分子，利用R

2、 N A 干擾技術(shù)，抑制M H C I I 基因的表達(dá)，觀察對異體角膜緣移植排斥反應(yīng)的影響。我們首先篩選了對M H C I I 表達(dá)抑制最強(qiáng)的靶向C I I T A 的s i R N A 鏈，建立大鼠異體角膜緣移植模型，檢測眼局部應(yīng)用靶向c I I T A 的s i R N A 能否抑制異體角膜緣移植的排斥反應(yīng)。從而評價R N A 干擾抑制M t t C I I 表達(dá)的治療效果以及s i C I IT A 對植片存活的作用。研究方法1

3、目的第一部分靶向C ⅡT A 的特異性s i R N A 的篩選探討靶向主要組織相容性復(fù)合物( M H C ) I I 類抗原轉(zhuǎn)錄激活因子( M H C I It r a n s a c t i v a t o rC I IT A ) 的化學(xué)合成小于擾R N A ( s m a l l i n t e r f e r i n gR N A ) 抑制大鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞表面的M H C I I 類抗原表達(dá)的可行性。2 方法2 ．1 大鼠角膜基

4、質(zhì)細(xì)胞的分離和培養(yǎng)沿大鼠角膜緣剪下角膜，用含有慶大霉索( 5 0 蟾／m 1 ) 的無菌生理鹽水沖沈數(shù)次然后置于6 孔板中，在0 ．0 5 ％的膠原酶Ⅳ中孵育過夜，分離細(xì)胞，然后，用吸管機(jī)械性輕柔吹打成混懸液，用D M E M ／F 1 2 沖洗并離心后，然后用含有1 5 ％新生牛血清的D M E M ／F 1 2 培養(yǎng)基在3 7 。C 、5 ％C 0 ：飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2 ．2 大鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞s i R N A 的轉(zhuǎn)染使用無雙