IRAK-4對(duì)成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)過(guò)程中轉(zhuǎn)錄因子Runxd2的影響.pdf

1、目的：通過(guò)研究白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶-4(interleukin-1 receptor associatedki-nase-4，IRAK-4)對(duì)成骨細(xì)胞形成過(guò)程中特異性轉(zhuǎn)錄因子Runx2的影響。探討IRAK-4對(duì)成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程中特異性轉(zhuǎn)錄因子Runx2的作用機(jī)制，為臨床治療骨不連提供新的思路及理論指導(dǎo)。
　　 方法：⑴利用小鼠肌源細(xì)胞C2C12建立間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為成骨細(xì)胞的模型，實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為3組:對(duì)照組:細(xì)胞懸液中不加任何

2、藥品;BMP-2組:在細(xì)胞懸液中加入BMP-21μg/ml; BMP-2+IRAK-4 siRNA組:在細(xì)胞懸液中加入IRAK-4 siRNA100pmol、BMP-21μg/ml。⑵堿性磷酸酶(ALP)熒光活性測(cè)定檢測(cè)不同濃度下BMP-2的成骨活性作用及干擾IRAK-4后對(duì)成骨細(xì)胞的分化影響。⑶采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)單獨(dú)或者聯(lián)合加入BMP-2及IRAK-4 siRNA對(duì)成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程中特異性轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子Ru

3、nx2 mRNA表達(dá)的影響。⑷蛋白印跡法(Western blot)法檢測(cè)單獨(dú)或者聯(lián)合加入BMP-2及IRAK-4siRNA對(duì)成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程中特異性轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子Runx2蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：①經(jīng)過(guò)堿性磷酸酶染色、蘇木素復(fù)染可見(jiàn)成骨細(xì)胞紅棕色顆粒;茜素紅染色法可見(jiàn)成骨細(xì)胞特征性橘紅色結(jié)節(jié)，鑒定為成骨細(xì)胞。②BMP-2對(duì)成骨細(xì)胞的轉(zhuǎn)化有促進(jìn)作用且有量效相關(guān)性。③干擾IRAK-4后對(duì)成骨細(xì)胞的分化有促進(jìn)作用。④BMP-

4、2+IRAK-4 siRNA組通過(guò)RT-PCR結(jié)果顯示Runx2 mRNA的表達(dá)量高于對(duì)照組、BMP-2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。⑤BMP-2+IRAK-4 siRNA組通過(guò)Western blot結(jié)果顯示Runx2蛋白的表達(dá)量增高。
　　 結(jié)論：⑴BMP-2可以促進(jìn)間充質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，并且有量效相關(guān)性。⑵IRAK-4對(duì)成骨細(xì)胞的分化有抑制作用。此抑制作用是通過(guò)抑制成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程中特異性轉(zhuǎn)錄因子Runx2的