“更年春”方對(duì)成骨細(xì)胞活性的影響及對(duì)ER亞型、BMP-2的調(diào)節(jié).pdf

1、絕經(jīng)后婦女雌激素水平降低、骨吸收大于骨形成而引起骨質(zhì)疏松(osteoporosis，0P)。骨質(zhì)疏松是以進(jìn)行性骨丟失、骨小梁退行性變、骨脆性增加和易發(fā)骨折為特征的疾病，絕經(jīng)后婦女OP發(fā)病率和骨折率可隨年齡增長(zhǎng)而升高。 隨著世界人口的老齡化，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松(postmenopausalosteoporosis，PMOP)已成為前所未有的社會(huì)問(wèn)題。據(jù)估計(jì)，約有1／3的絕經(jīng)后婦女會(huì)受到不同程度0P的困擾，因而，早期預(yù)防和治療本病具有十

2、分重要的意義。 “更年春”(Gengnianchunformula，GNC)方是我院根據(jù)圍絕經(jīng)期腎陰虛這一主要證候，以滋腎柔肝、清心瀉火為治則所制定，臨床驗(yàn)證治療更年期綜合征效果良好。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：“更年春"對(duì)去卵巢大鼠椎骨和股骨的骨密度與生物力學(xué)參數(shù)有顯著的改善作用，且沒(méi)有刺激子宮組織增生肥大的副作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外分離、培養(yǎng)成骨細(xì)胞，研究中藥復(fù)方“更年春”藥物血清對(duì)新生大鼠成骨細(xì)胞活性——增殖、分化和礦化的影響，以及對(duì)成骨細(xì)胞雌

3、激素受體亞型和骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2表達(dá)的調(diào)節(jié)，以進(jìn)一步探討GNC防治原發(fā)性骨質(zhì)疏松的療效及機(jī)理。 第一部分 目的：觀(guān)察中藥復(fù)方“更年春”藥物血清對(duì)新生大鼠成骨細(xì)胞增殖、分化和礦化的影響。 方法：用酶消化法分離培養(yǎng)新生大鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞，加入含不同濃度的“更年春”藥物血清條件培養(yǎng)液培養(yǎng)，生理鹽水作為陰性對(duì)照組，尼爾雌醇作為陽(yáng)性對(duì)照組。MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖率，對(duì)硝基苯酚法(PNPP)檢測(cè)堿性磷酸酶(ALP)活性

4、以觀(guān)察成骨細(xì)胞的分化，茜素紅染色觀(guān)察礦化結(jié)節(jié)個(gè)數(shù)。 結(jié)果：與生理鹽水組相比，“更年春”不同劑量組及雌激素組MTT值(即吸光度0D570值)均明顯增高(尸均

5、量組／KO．05、余]KO．01)；與雌激素組相比，中藥高劑量組更能增加堿性磷酸酶活性值(／KO．05)。與生理鹽水組相比，“更年春”高劑量組及雌激素組礦化結(jié)節(jié)個(gè)數(shù)均增加(前者／KO．01、后者／KO．05)：中藥高劑量組礦化結(jié)節(jié)數(shù)顯著高于雌激素組(／KO．05)。 結(jié)論：“更年春”在體外對(duì)成骨細(xì)胞的增殖、分化和礦化有明顯促進(jìn)作用，呈明顯劑量依賴(lài)性，高劑量組明顯優(yōu)于雌激素組，提示其防治骨質(zhì)疏松的作用可能與其促進(jìn)成骨細(xì)胞的活性有關(guān)

6、。 第二部分 目的：觀(guān)察中藥復(fù)方“更年春”藥物血清對(duì)新生大鼠成骨細(xì)胞雌激素受體亞型(α、β)及骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(BMP一2)表達(dá)的影響。 方法：用酶消化法分離培養(yǎng)新生大鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞，加入含不同藥物濃度的“更年春”藥物血清條件培養(yǎng)液，生理鹽水作為陰性對(duì)照組，尼爾雌醇作為陽(yáng)性對(duì)照組。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)成骨細(xì)胞ERα、B及骨形態(tài)發(fā)生蛋白一2(BMP一2)的表達(dá)。 結(jié)果：與生理鹽水組相比，尼爾雌醇組成骨

7、細(xì)胞ERQ、βmRNA的表達(dá)均增加(兩者p<0.05)，“更年春”不同劑量組成骨細(xì)胞ERβmRNA的表達(dá)均增加(p<0.01),ERQmRNA的表達(dá)無(wú)明顯變化。與雌激素組相比，更年春組ERBmRNA的表達(dá)增加，以高劑量為明顯(p<0.01)。與生理鹽水組相比，尼爾雌醇組和更年春組BMP-2mRNA的表達(dá)均增加(高、中劑量組／KO．01，低劑量組、尼爾雌醇組／KO．05)。與雌激素組相比，中藥高、中劑量組BMP-2mRNA的表達(dá)增加(／K

8、O．01，／KO．05)。相關(guān)分析顯示ERB與BMP一2呈正相關(guān)，回歸系數(shù)=O．667，／KO．01。 結(jié)論；中藥復(fù)方“更年春”高、中、低劑量均能促進(jìn)成骨細(xì)胞雌激素受體亞型β、骨形態(tài)發(fā)生蛋白一2mRNA的表達(dá)增加，且呈劑量依賴(lài)性，而對(duì)雌激素受體α無(wú)影響，以高劑量組最為顯著。相關(guān)回歸分析表明：ERB與BMP一2呈明顯正相關(guān)(／KO．01)，由此推測(cè)“更年春”作用機(jī)理可能通過(guò)上調(diào)雌激素受體β表達(dá)，促進(jìn)骨形態(tài)發(fā)生蛋白一2的表達(dá)，進(jìn)而促