谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶（M1、T1、P1）基因型與浙江漢族人群散發(fā)性大腸癌易感性的關(guān)系.pdf

1、目的： 探討谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶(GST)M1、T1、P1基因型與中國(guó)浙江漢族人群散發(fā)性大腸癌(SCRAC)易感性的關(guān)系。 方法： 1、選取經(jīng)病理組織學(xué)確診的120例SCRAC患者，均來(lái)自我院消化內(nèi)科及普外科住院或門(mén)診患者；204例健康對(duì)照來(lái)自同期我院體檢中心健康體檢者。全部研究對(duì)象均為無(wú)血緣關(guān)系的中國(guó)浙江漢族人，SCRAC患者采血前均未行放射及化學(xué)治療。 2、提取基因組DNA：采用蛋白酶K/酚/氯仿法抽提DN

2、A，紫外分光光度計(jì)定量，4℃保存?zhèn)溆谩?3、分別對(duì)GSTM1、GSTT1、GSTP1基因進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)。 3.1采用多重聚合酶鏈反應(yīng)(Multi-PCR)技術(shù)分別擴(kuò)增GSTM1、GSTT1目的基因，以β球蛋白(268bp)為參照物，用5％聚丙烯酰胺凝膠電泳及1.8％硝酸銀染色檢測(cè)PCR產(chǎn)物，GSTM1、GSTT1擴(kuò)增后產(chǎn)物長(zhǎng)度分別為157bp、480bp。GSTM1、GSTT1基因型判斷：若有157bp片段和480bp片

3、段者分別為GSTM1(+)和GSTT1(+)，而無(wú)相應(yīng)的擴(kuò)增產(chǎn)物者為純合子基因缺失，分別為GSTM1(-)(即空白GSTM1基因型)和GSTT1(-)(即空白GSTT1基因型)。 3.2采用多重聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)擴(kuò)增GSTP1目的基因，PCR反應(yīng)產(chǎn)物用BsmAⅠ限制性內(nèi)切酶消化，以β球蛋白(268bp)為參照物，酶切產(chǎn)物用8％聚丙烯酰胺凝膠電泳及1.8‰硝酸銀染色檢測(cè)。GSTP1基因型判斷：若酶切產(chǎn)物含329bp、113bp兩個(gè)片

4、段，則為ILe/ILe基因型(野生型)；若酶切產(chǎn)物含329bp、216bp、113bp三個(gè)片段，則為ILe/VaL基因型(雜合突變型)；若酶切產(chǎn)物含216bp、113bp兩片段，則為VaL/VaL基因型(純合子突變型)。 4、進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，分析比較GSTM1、GSTT1、GSTP1基因型在SCRAC患者和健康人群中的分布差異。將所有數(shù)據(jù)輸入SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包，采用x2檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)，計(jì)算OR值和95％可信區(qū)間，P＞0.0

5、5有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： GSTM1(-)、GSTT1(-)及GSTP1突變基因型(VaL/VaL)頻率在SCRAC組和對(duì)照組分布均有顯著性差異(57.5％vs44.1％，x2=5.414，P=0.020，OR=1.714，95％CI：1.087～2.702:53.3％vs41.7％，x2=4.140，P=0.042，OR=1.600，95％CI:1.016～2.519:45.0％vs30.4％，x2=7.015，P=0

6、.008，OR=1.874，95％CI:1.174～2.990)。根據(jù)SCRAC臨床特征進(jìn)一步分層分析，發(fā)現(xiàn)GST(M1、T1、P1)基因型均與年齡因素?zé)o關(guān)(P＞0.05)；GSTM1(-)及GSTP1突變基因型(VaL/VaL)在遠(yuǎn)端SCRAC(P=0.035；P=0.036)、DukesC期SCRAC(P=0.002；P=0.029)及低分化SCRAC(P=0.013；P=0.006)中的分布頻率均明顯增高；GSTT1(-)基因型則