沙利度胺抑制肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：中國大陸原發(fā)性肝癌的發(fā)病率呈逐年升高的趨勢，并且由于腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移其死亡率也在升高。沙利度胺（thalidomide，ThD）目前用于多發(fā)性骨髓瘤、肝細(xì)胞癌、轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌等的抗癌治療。沙利度胺能影響肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移，而其作用肝細(xì)胞癌的分子作用機(jī)制尚不明確。因此，本研究通過沙利度胺作用于HepG2細(xì)胞來了解Nf-kb及骨橋蛋白(OPN)表達(dá)與HepG2細(xì)胞的增殖、凋亡及遷移能力的關(guān)系。
　　方法：采用一定濃度沙利度胺、核轉(zhuǎn)錄因子

2、核因子-κB(NF-κB)活性特異性抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC)及沙利度胺聯(lián)合PDTC作用于HepG2細(xì)胞后，CountingKit-8（CCk-8）法、細(xì)胞劃痕、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)檢測沙利度胺及PDTC對(duì)HepG2細(xì)胞的增殖、凋亡及遷移能力的影響。蛋白印跡（Westernblot）實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果來評(píng)價(jià)沙利度胺及PDTC作用后Nf-kb及OPN的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±?標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

3、用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組間的比較用t檢驗(yàn)，多組間的比較用單因素方差分析，顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)α取0.05。
　　結(jié)果：1、CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：沙利度胺（100μg/ml）聯(lián)合PDTC（10uM/L）組、沙利度胺（100μg/ml）組及PDTC（10uM/L）組在48h作用時(shí)間后細(xì)胞生存率為（30.407±2.596）％、（59.555±2.629）%、（48.374±5.997）%。三組間相比P值均<0.05，差異具

4、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并且沙利度胺聯(lián)合PDTC組相對(duì)沙利度胺及PDTC組可獲得對(duì)HepG2細(xì)胞更高的抑制率。
　　2、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在藥物作用48小時(shí)，沙利度胺（100μg/ml）聯(lián)合PDTC（10uM/L）組、沙利度胺（100μg/ml）組及PDTC（10uM/L）組與對(duì)照組細(xì)胞遷移率之比分別為（49.701±8.672）%、（60.984±10.244）%、（73.198±10.960）%，三組間相比P值均<0.05，差異具有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且沙利度胺聯(lián)合PDTC組的遷移率低于沙利度胺及PDTC組。
　　3、Tranwsell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在沙利度胺（100μg/ml）聯(lián)合PDTC（10uM/L）、沙利度胺（100μg/ml）及PDTC（10uM/L）作用48h后，沙利度胺聯(lián)合PDTC組穿過人工基底膜細(xì)胞數(shù)明顯減少，與沙利度胺及PDTC組相比(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4、流式實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在沙利度胺（100μg/ml）聯(lián)合PDTC

6、（10uM/L）、沙利度胺（100μg/ml）及PDTC（10uM/L）作用48小時(shí)后，沙利度胺聯(lián)合PDTC組細(xì)胞凋亡率增高，相比沙利度胺及PDTC組(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5、westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在沙利度胺（100μg/ml）聯(lián)合PDTC（10uM/L）、沙利度胺（100μg/ml）及PDTC（10uM/L）作用48h后，沙利度胺聯(lián)合PDTC組HepG2細(xì)胞中NF-KB、OPN表達(dá)量明顯降低，